基于猪口蹄疫O型病毒结构蛋白VP1基因的mRNA疫苗制备及免疫活性研究

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是危害养猪(Sus scrofa domesticus)业最重要的传染病之一,疫苗免疫是防控口蹄疫的重要手段之一.由于口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)容易发生变异,致使候选疫苗株和流行毒株间的抗原不匹配,从而影响疫苗免疫效力和疫病预防效果.本研究根据结构蛋白VP1(viral structural protein 1)基因序列和功能,以猪口蹄疫病毒O型毒株(O/MYA98/BY/2010株)灭活抗原为模板,扩增结构蛋白VP1基因,并与pSFV1载体连接构建重组质粒pSFV1-VP1.重组质粒经线性化、体外转录等方法处理获得的mRNA,转染BHK-21细胞并验证表达效果,然后与制备的脂质体纳米颗粒混合免疫豚鼠(Cavia porcellus),进行免疫应答水平和攻毒保护效果检测.结果表明,mRNA转染乳仓鼠肾(baby hamster syrian kidney-21,BHK-21)细胞24 h后,采用免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法均证实VP1得到表达;mRNA疫苗免疫豚鼠后血清中特异性抗体、中和抗体、γ干扰素(γinterferon,IFN-γ)和白介素4(interleukin 4,IL-4)均显著高于阴性对照组.试制的mRNA疫苗免疫豚鼠可以对50倍50％豚鼠感染量(50％guinea pig infectious dose,GPID50)的O/MYA98/BY/2010株攻击提供4/4保护.以上结果表明,试制的mRNA疫苗可以诱导较强的体液免疫与细胞免疫应答,免疫原性良好.本研究为研制口蹄疫紧急预防接种疫苗提供了新途径.