长链非编码RNA前列腺癌相关转录本7对三阴性乳腺癌MDA-MB-436细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA前列腺癌相关转录本7(lncRNA PCAT7)对三阴性乳腺癌MDA-MB-436细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 设计合成lncRNA PCAT7-siRNA1、lncRNA PCAT7-siRNA2、lncRNA PCAT7-siRNA3及control siRNA.MDA-MB-436细胞培养至细胞融合度达80％时,将细胞分为lncRNA PCAT7-siRNA1组、lncRNA PCAT7-siRNA2组、lncRNA PCAT7-siRNA3组3个干扰组和1个空载组,分别转染lncRNA PCAT7-siRNA1、lncRNA PCAT7-siRNA2、lncRNA PCAT7-siRNA3和control siRNA,转染6 h后细胞用完全培养基继续培养48 h,收集各组细胞,采用实时聚合酶链反应法检测转染后各组细胞lncRNA PCAT7表达情况,选择lncRNA PCAT7表达水平最低的lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞用于后续实验.采用克隆形成实验检测lncRNA PCAT7-siRNA3组和空载组MDA-MB-436细胞的增殖能力,划痕实验检测lncRNA PCAT7-siRNA3组和空载组MDA-MB-436细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测lncRNA PCAT7-siRNA3组和空载组MDA-MB-436细胞的侵袭能力,流式细胞术检测lncRNA PCAT7-siRNA3组和空载组MDA-MB-436细胞周期分布情况,Western blot法检测lncRNA PCAT7-siRNA3组和空载组MDA-MB-436细胞p27蛋白表达情况.结果 lncRNA PCATT-siRNA1干扰组MDA-MB-436细胞中lncRNA PCAT7 mRNA相对表达量与空载组比较差异无统计学意义(t=-4.286,P>0.05),lncRNA PCAT7-siRNA2组、lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞中lncRNA PCAT7 mRNA相对表达量显著低于空载组(t=-28.028、-47.748,P<0.05),lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞中lncRNA PCAT7 mRNA相对表达量显著低于lncRNA PCAT7-siRNA2组(t=12.705,P<0.01),选用转染lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞进行后续实验.培养14 d后,lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞克隆形成数显著少于空载组(t=-7.434,P<0.01).细胞划痕培养48 h后,lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞划痕愈合率显著低于空载组(t=-11.340,P<0.01).lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞侵袭数显著少于空载组(t=-7.120,P<0.01).lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436组细胞G0/G1期细胞比例显著高于空载组,G2/M期细胞比例显著低于空载组(t=4.920、-6.990,P<0.01),lncRNA PCAT7-siRNA3组与空载组MDA-MB-436细胞S期细胞比例比较差异无统计学意义(t=0.083,P>0.05).lncRNA PCAT7-siRNA3组MDA-MB-436细胞中p27蛋白相对表达量显著高于空载组(t=3.200,P<0.05).结论 下调lncRNA PCAT7可抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-436细胞的增殖、迁移与侵袭能力,其调控机制可能与增加细胞周期抑制蛋白p27表达及阻滞细胞周期有关.