褪黑素对胶原诱导性关节炎大鼠踝关节炎症的作用

目的 探讨褪黑素对胶原诱导性关节炎大鼠踝关节组织炎症的作用及其对T细胞平衡的影响.方法 Wistar大鼠24只,随机分为对照组、模型组、褪黑素组、泼尼松龙组各6只.模型组、褪黑素组、泼尼松龙组大鼠分别于实验第1天、第7天尾部皮下注射200 μL牛Ⅱ型胶原蛋白乳剂制备胶原诱导性关节炎大鼠模型,对照组大鼠注射相同剂量生理盐水.褪黑素组给予褪黑素溶液灌胃,1次/d,连续30 d;泼尼松龙组给予泼尼松龙溶液灌胃,1次/d,连续30 d;对照组及模型组大鼠注射相同剂量生理盐水.实验第16天,评估模型组、褪黑素组、泼尼松龙组胶原诱导性关节炎发生情况;实验第30天,4组大鼠取踝关节组织,采用HE染色观察关节组织病理改变情况并对模型组、褪黑素组、泼尼松龙组大鼠踝关节炎症、软骨细胞死亡、软骨表面侵蚀和骨侵蚀行组织病理学评分;应用流式细胞仪检测4组大鼠脾脏组织CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞、白细胞介素(interleukin,IL)-4+CD4+T 细胞、干扰素(interferon-γ,IFN-γ)+CD4+T 细胞表达情况;采用实时荧光定量PCR法检测4组大鼠脾脏组织Foxp3 mRNA相对表达量;采用ELISA法检测4组大鼠踝关节滑液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 A、IL-6、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平.结果 实验第16天,模型组胶原诱导性关节炎发生率(83.33％)高于褪黑素组(16.67％)(x2=5.333,P=0.021),泼尼松龙组(50.00％)与模型组、褪黑素组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).实验第30天,模型组踝关节骨质侵蚀、软骨破坏,褪黑素组、泼尼松龙组踝关节骨质均轻度侵蚀,软骨均未见明显异常.模型组踝关节炎症[(2.94±0.16)分]、软骨细胞死亡[(2.78±0.12)分]、软骨表面侵蚀[(2.03±0.10)分]、骨侵蚀[(1.56±0.07)分]组织病理学评分均高于褪黑素组[(1.45±0.06),(0.54±0.03)、(0.78±0.02),(0.48±0.03)分]、泼尼松龙组[(1.32±0.06)、(0.47±0.03)、(0.72±0.02)、(0.52±0.03)分](P＜0.05),褪黑素组与泼尼松龙组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).模型组、褪黑素组、泼尼松龙组脾脏组织CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞、IL-4+CD4+T细胞比率及踝关节滑液IL-4、IL-10、TGF-β1水平均低于对照组(P＜0.05),模型组均低于褪黑素组、泼尼松龙组(P＜0.05);模型组、褪黑素组、泼尼松龙组脾脏组织IFN-γ+CD4+T细胞比率及踝关节滑液TNF-α、IL-17A、IL-6、IFN-γ水平均高于对照组(P＜0.05),模型组均高于褪黑素组、泼尼松龙组(P＜0.05);褪黑素组、泼尼松龙组脾脏组织Foxp3 mRNA相对表达量均高于对照组、模型组(P＜0.05),对照组高于模型组(P＜0.05);以上指标褪黑素组与泼尼松龙组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 褪黑素通过调节T细胞平衡,减轻胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症严重程度,延缓疾病进展.