基于非洲猪瘟病毒p30蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

p30是非洲猪瘟病毒(Africa swine fever virus,ASFV)感染早期表达的结构蛋白,为非洲猪瘟(ASF)早期诊断和抗体监测的重要靶标.为了建立ASFV ELISA抗体检测方法,本试验以重组p30作为检测抗原,通过方阵滴定法优化抗原包被质量浓度、封闭液以及待检血清和酶标抗体的稀释倍数;确立阴、阳性临界值,检测方法的特异性、敏感性和重复性;比较ELISA方法与商品试剂盒检测结果的符合率,并用Western blot对ELISA结果进行了验证.结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为1 mg/L,封闭液为5％的脱脂奶粉,待检血清与酶标抗体的稀释倍数分别为1∶100和1∶5 000倍,阴、阳性临界值为0.294.该方法与伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒等抗血清无交叉反应,敏感性高于商品试剂盒,批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.723％和4.923％.初步应用显示,建立的ELISA方法的血清抗体阳性检出率高于商品试剂盒,两者的总符合率为62.1％.进一步验证表明,建立的ELISA方法与Western blot的结果一致.上述结果表明,建立的ELISA方法具有良好特异性、重复性及更高的敏感性,可以为ASF的早期诊断、感染猪筛查及其有效防控提供重要技术支持.