毛萼乙素通过Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌细胞增殖的机制探讨

目的:探讨毛萼乙素(Eriocalyxin B,EriB)通过Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖的机制.方法:CCK-8、软琼脂克隆形成实验检测EriB对结直肠癌细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测EriB对结直肠癌细胞周期和凋亡的影响,无血清悬浮培养实验检测EriB对结直肠癌细胞干性的影响,Western blot检测周期、凋亡以及分子机制相关蛋白的表达变化,裸鼠皮下瘤实验体内检测EriB对结肠癌细胞生长增殖的影响,免疫组织化学染色检测小鼠皮下瘤组织Ki67的表达,SynergyFinder用于分析EriB对5-FU抗结直肠癌的协同作用.结果:与对照组相比,EriB处理显著抑制了结直肠癌细胞的存活(P<0.05或P<0.001),抑制干细胞球体数量(P<0.001).流式细胞术检测结果表明,与对照组相比,EriB处理组S期和G2期细胞百分比增加(P<0.001),细胞凋亡增加(P<0.001).Western blot结果显示,EriB处理细胞后,干性相关分子CD44、Sox2、Klf4表达下调,细胞周期相关蛋白CyclinA、Cdk2表达下调,凋亡相关蛋白Cl-PARP、Cl-caspase-3表达上调,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4、CyclinD1、c-myc表达下调.EriB与5-FU联合应用,经SynergyFinder分析,ZIP synergy得分大于+10,有协同作用.裸鼠异种移植瘤模型结果表明,与对照组相比,EriB处理显著抑制肿瘤生长,并减小裸鼠皮下异种移植瘤的体积(P<0.05).免疫组织化学分析显示,EriB处理组显著降低了肿瘤组织中Ki67的表达.结论:EriB可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖.