环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端(128aa-458aa)多克隆抗体的制备与反应原性分析

为获取DnaJ蛋白多克隆抗体,将截短的环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端核酸序列构建在pET-30a(+)质粒并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,经终浓度1 mmol/L IPTG 37℃C诱导表达,蛋白可溶性分析结果显示,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在.SDS-PAGE结果显示,纯化后的蛋白分为2条,其中一条蛋白大小约为41.65ku,与预期结果相符,另外一条蛋白可能因为翻译提前终止比预期条带位置偏低.将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化后,皮下分点注射BALB/c小鼠,制备小鼠源DnaJ蛋白多克隆抗体.通过Western-blot验证,发现截短后的环形泰勒虫DnaJ蛋白与抗His单克隆抗体、环形泰勒虫阳性血清和抗DnaJ多克隆抗体均能反应,表明该蛋白产物具有良好的反应原性.获得的多克隆抗体可用于研究环形泰勒虫DnaJ蛋白的功能.