体外鼠星形胶质细胞在刚地弓形虫急性和慢性感染期的活化状态分析

目的 探讨体外条件下急性和慢性弓形虫感染对小鼠神经免疫细胞(星形胶质细胞)的活化状态及炎症细胞因子分泌的影响.方法 小鼠星形胶质细胞C8-D1A体外培养12 h后,加入纯化的弓形虫速殖子共培养0～72 h,取共培养1、2、8、12、24、36、48 h的培养物行瑞氏-吉姆萨染色,观察速殖子的胞内入侵增殖过程.弓形虫速殖子以1:10的虫体与细胞比例接种于单层C8-D1A细胞中,共培养8 h后采用pH 8.2的碱性培养基于37℃自然条件下诱导速殖子向缓殖子转化,诱导转化96 h后RT-PCR检测缓殖子期特异蛋白BAG1基因的表达.分别取感染24、36 h及转化后96 h的培养物,采用Western blot方法检测鼠星形胶质细胞标记蛋白GFAP和vimentin的表达水平,采用qPCR法检测小鼠星形胶质细胞分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)以及白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)mRNA的表达水平.结果 体外条件下弓形虫黏附入侵鼠星形胶质细胞过程慢于入侵上皮细胞及巨噬细胞系.速殖子1 h后开始黏附,2 h后启动入侵,8 h后少数虫体开始分裂增殖,24 h后出现"菊花状"假包囊,48～72 h虫体逸出.急性感染期C8-D1A细胞表达的GFAP和vimentin水平与空白组比较无显著变化,慢性感染期则显著升高.急性感染期TNF-α mRNA表达量与对照组比较无显著变化(t=0.4539、2.516,P 均＞0.05),IL-6和 IL-12 mRNA 表达显著升高(t=7.260、12.62,P 均＞0.05),IL-1β mRNA 表达则显著降低(t=21.23,P＜0.05).慢性感染期C8-D1A细胞TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达水平均显著降低(t=4.084、17.00、21.24,P均＜0.05),IL-12 mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(t=1.992,P＞0.05).结论 缓殖子期弓形虫在体外条件下可诱导星形胶质细胞活化,但不同感染阶段关键细胞因子的表达有明显波动.