Lasermikrodissektion zur Analyse molekularer Heterogenität im kolorektalen Karzinom

Zusammenfassung Hintergrund Onkogene Treibermutationen der RAS/RAF -Onkogene treten beim kolorektalen Karzinom (CRC) gehäuft auf. Das Vorhandensein verschiedener klonaler Subpopulationen innerhalb eines einzelnen Tumors kann zu einem Behandlungsversagen bei Anti-EGFR/„epidermal growth factor receptor“-gerichteten Antikörpertherapien führen. Die Identifizierung verschiedener Subklone und ihre Mutationsprofile sowie die Analysen von morphologisch unterschiedlichen Tumorarealen könnten dazu beitragen, neue Aspekte der Tumorbiologie und Therapieresistenz aufzudecken. Ziele Ziel war es, die intratumorale Heterogenität des CRC zu untersuchen. Dazu verwendeten wir vergleichend die routinemäßig verwendete Methodik und das Lasermikrodissektionsverfahren (LMD). Material und Methoden Wir etablierten das LMD-Verfahren, isolierten bei 2 Patienten DNA aus mehreren morphologisch unterschiedlichen CRC-Tumorbereichen ( n = 13) und verglichen die Ergebnisse des Routinetestverfahrens mit dem neu etablierten LMD-Ansatz. Ergebnisse In einigen Analyseansätzen konnten potenzielle Low-Level-Mutationen (PLLM) mit der Routinemethode nicht detektiert werden, da sie durch High-Level-Mutationen (HLM) überlagert wurden. Durch die Verwendung des LMD konnten in den Patientenproben neben der bekannten HLM auch mehrere PLLM innerhalb der NRAS - und BRAF -Gene identifiziert werden. Schlussfolgerung Zusammenfassend ermöglichte das LMD-Verfahren in der molekularen Analyse eine verbesserte räumliche Auflösung des CRC-Tumorgewebes verglichen mit der Routinemethode. Unsere Ergebnisse bestätigten das Vorhandensein der intratumoralen molekularen Heterogenität beim CRC. Dieser Aspekt sollte bei der Interpretation von Sequenzierungsergebnissen berücksichtigt werden, da Niedrigfrequenzmutationen einen Einfluss auf die Wirksamkeit einer zielgerichteten Therapie haben können.