猪鼻支原体热不稳定延伸因子黏附宿主细胞机制的研究

为研究热不稳定延伸因子(EF-Tu)在猪鼻支原体(Mhr)与宿主互作中的功能,本研究构建了重组质粒pET-EF-Tu并经PCR鉴定正确后,转化BL21(DE3)大肠杆菌后,通过IPTG诱导表达、镍柱亲和层析纯化获得纯化的重组蛋白rEF-Tu.将重组蛋白免疫家兔制备高免血清,采用ELISA方法检测其效价.利用该免疫血清通过western blot和菌落免疫杂交的方法分析EF-Tu在Mhr表面的表达情况,ELISA结果显示制备的多克隆抗体效价达1:200000以上,且rEF-Tu可表达于Mhr表面;通过间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测rEF-Tu对猪肾细胞(PK-15)的黏附能力,结果显示rEF-Tu具有黏附能力且该黏附作用具有剂量依赖性;进一步利用微孔板的方法检测rEF-Tu蛋白结合于纤溶酶原和细胞外基质成分的能力,结果表明rEF-Tu蛋白可结合于宿主纤溶酶原以及不同的细胞外基质成分(纤连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和玻连蛋白).本研究结果表明EF-Tu可于Mhr表面表达、可黏附宿主细胞,并可结合纤溶酶原和多种细胞外基质成分,在Mhr的感染及致病中可能具有重要功能.