利用GT1-7细胞系研究ghrelin对下丘脑刺鼠相关蛋白的表达效果

目的 介绍一种可对ghrelin(胃促生长素,俗称饥饿素)刺激产生反应的细胞系,并观察ghrelin对刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AgRP)基因表达的影响.方法 通过蛋白印迹(Western blotting)法检测证实GT1-7细胞是否具有ghrelin可以结合的生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR);通过给予GT1-7细胞血清饥饿,以及在含血清状态下给予不同时间ghrelin刺激或不同浓度的ghrelin刺激,经实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检验AgRP mRNA表达量差异.结果 GT1-7细胞具有GHSR;血清饥饿显著增加了GT1-7细胞的AgRP mRNA表达(P<0.001);在含血清状态下,与空白对照组及ghrelin刺激1 h组比较,ghrelin刺激3 h组可使GT1-7细胞AgRP mRNA的表达显著增加(P=0.002,P=0.008);在含血清状态下,低浓度(10、50 nmol/L)ghrelin显著低于高浓度(100 nmol/L)ghrelin刺激的AgRP mRNA表达(P=0.021,P=0.016).结论 血清饥饿可以使GT1-7细胞增加AgRP mRNA的表达.Ghrelin即使在含血清状态下也可以刺激GT1-7细胞增加AgRP mRNA表达,并且为时间及浓度依赖.因此,GT1-7细胞可作为研究下丘脑神经元对AgRP调控,以及下丘脑神经元对其他代谢功能的调节,尤其是其背后分子机制研究的体外模型.