靶向脑胶质瘤的Ang外泌体递送系统的构建

目的 构建可以精准靶向胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的外泌体.方法 构建靶向GBM的Ang-Lamp2b-HA质粒,将Ang-Lamp2b-HA质粒和对照pcDNA3.1载体质粒分别转染入HEK293T细胞后提取工程化外泌体Ang-exo和对照未修饰外泌体Unmod-exo,使用蛋白免疫印迹技术观察两组外泌体标志蛋白表达情况,使用扫描电镜和纳米颗粒分析仪观察两组外泌体形态学表征.建立基于Transwell系统的bEnd.3/LN229体外血脑屏障模型,上下腔室分别接种bEnd.3细胞和LN229细胞,生成完整屏障后,分别在上腔室中加入已染色的Ang-exo和Unmod-exo,通过共聚焦激光扫描显微镜观察两组外泌体在下腔室中胶质瘤细胞荧光强度,验证Ang-exo穿透血脑屏障能力和靶向的能力.已染色的Ang-exo和Unmod-exo外泌体分别通过尾静脉注射入荷瘤小鼠模型,通过活体动物成像和离体器官成像观察两组外泌体在荷瘤小鼠体内荧光分布变化,验证其穿透血脑屏障能力和靶向效果.将Ang-exo与生理盐水分别尾静脉注射入健康小鼠体内,观察比较器官变化情况,对比血液生物化学和炎性因子指标差异.结果 转染Ang-Lamp2b-HA质粒和对照pcDNA3.1载体质粒的HEK293T细胞分别产生分泌Ang-exo和Unmod-exo,两组外泌体外形和粒径大小无明显差异.经过体外血脑屏障模型功能鉴定,与Unmod-exo组相比,Ang-exo组穿透血脑屏障的数目明显较高(P＜0.05).与Unmod-exo组相比,Ang-exo组脑部肿瘤区域的荧光强度较高(P＜0.05).与生理盐水组比较,Ang-exo组小鼠血液学指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)等肝肾损伤标志物水平,γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)等血清炎性细胞因子水平,脑、心、肺、肝、脾和肾等器官均无明显变化(P＞0.05).结论 Ang-exo可以精准靶向GBM,是一种可靠的药物运载平台,为GBM治疗药物的递送提供了新的策略.