山姜素靶向调控Nrf2抑制H9C2细胞氧化应激反应

目的 观察山姜素(alpinetin,ALP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠心肌细胞(H9C2)的作用,并探讨其机制.方法 采用不同因素干预H9C2细胞后,使用细胞毒性检测试剂盒(cell counting Kit?8,CCK?8)检测细胞活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real?time fluorescence PCR,RT?PCR)检测基因的表达;Western blot检测蛋白的表达;酶标仪及免疫荧光显微镜检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达;试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活力.结果 细胞活性:LPS组细胞活性明显低于对照组(P<0.01),加入山姜素后,可显著提高细胞活性(P<0.01),LPS组LDH活性明显高于对照组(P<0.01);氧化应激分子及基因表达:与对照组相比,LPS组心肌细胞中ROS的表达水平显著上调,细胞内MDA含量显著升高,SOD活力显著下降,抗氧化因子基因表达水平均被显著抑制(P<0.01),加入ALP后可显著抑制ROS的表达水平及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD含量,同时上调抗氧化因子基因表达水平(P<0.01);信号通路:LPS组中Keap1蛋白表达水平高于对照组,Nrf2蛋白表达水平低于对照组(P<0.01),加入ALP(10 mg/L)后可逆转以上两种蛋白的表达水平(P<0.01);验证机制:与LPS组相比,LPS+ALP(10 mg/L)可抑制ROS的表达(P<0.01),加入siNrf2后则可显著逆转ALP带来的保护作用,ROS水平显著上调(P<0.01),抗氧化因子基因表达水平同样得到证实.结论 山姜素可靶向调控Nrf2信号通路的活化从而改善LPS诱导的H9C2氧化应激反应.