鉴别滑液囊支原体MS-Y田间株与MS-H疫苗株多重PCR方法的建立

为了建立一种快速准确鉴别滑液囊支原体MS-Y分离株和活疫苗MS-H的方法,根据滑液囊支原体ppm和deoD基因的2个碱基突变位点序列,运用错配扩增突变分析(MAMA)PCR方法,设计了 2对特异性引物和1对通用引物,用于扩增目的基因,通过优化反应条件,建立一种能同时鉴别出MS-Y和MS-H的多重PCR检测方法,并检测了该方法的特异性和敏感性.结果显示,利用特异性引物的多重PCR方法能同时鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和滑液囊支原体MS-Y分离株的DNA,分别扩增出相应的特异目的条带,检测MS-H株的最低敏感度为4.21×105copies/μL,检测MS-Y株的最低敏感度为6.47×105 copies/μL;而利用通用引物对检测滑液囊支原体DNA的最低浓度为2.18×103 copies/μL,检测MS-H DNA的浓度下限均为1×105CCU/mL,检测MS-YDNA的最低浓度为1×103CCU/mL.本研究建立了一种能同时快速鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和MS-Y分离株的多重PCR方法.