微透析-高效液相色谱-化学发光法动态监测6-羟基多巴帕金森病模型大鼠纹状体内多巴胺水平

目的:建立动态监测自由清醒大鼠纹状体内多巴胺水平的微透析-高效液相色谱-化学发光分析法,研究天然冰片联合左旋多巴对6-羟基多巴诱导的帕金森病(PD)模型大鼠纹状体内多巴胺水平的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、6-羟基多巴PD模型组、左旋多巴组和天然冰片联合左旋多巴组.模型组大鼠麻醉后于右侧前脑内侧束缓慢注入4μg·μL-1 6-羟基多巴,术后4周腹腔注射0.5 mg·kg-1阿扑吗啡,筛选旋转圈数≥7 r·min-1(或每30 min 210 r)的大鼠作为6-羟基多巴诱导的PD模型动物.采用脑微透析活体采样联用高效液相色谱-化学发光法(HPLC-CL)监测自由清醒大鼠纹状体内多巴胺水平的动态变化.HPLC分离系统包括Shim pack ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),三水合乙酸钠缓冲液-乙腈(80:20)作为流动相,流速为1.0 mL·min-1,柱温为37℃.CL检测系统包括3 μmol·L-1鲁米诺溶液、稀释1 000倍的纳米金溶液和50 μmol·L-1Ag(Ⅲ)溶液.结果:建立的HPLC-CL法分析多巴胺在0.05～50 ng·mL-1范围内线性关系良好,检测限为0.014 ng·mL-1.与左旋多巴组相比,天然冰片联合左旋多巴组大鼠脑微透析液中游离多巴胺药时曲线下面积(AUC0-t)从3.042 h·ng·mL-1增加到4.395 h·ng·mL-1,达峰时间(Tmax)从1.516 h缩短为1.028 h;峰浓度(Cmax)从0.435 ng·mL-1升高到0.792 ng·mL-1,更接近于正常组大鼠脑透析液中游离多巴胺水平(0.971 ng·mL1).结论:天然冰片可促进左旋多巴快速入脑并转化为多巴胺,这可能与天然冰片提高左旋多巴的血脑屏障通透性有关.本研究结果可为天然冰片联合左旋多巴用药临床治疗PD提供科学依据.