免疫细胞糖酵解基因表达及相关免疫细胞在实验性自身免疫性神经炎小鼠中的变化

目的:探讨免疫细胞糖酵解基因表达及相关免疫细胞在实验性自身免疫性神经炎（EAN）小鼠的变化，深化EAN发病机制研究。方法:将24只雄性C57BL/6小鼠（6~8周龄，18~20 g）按随机数字表法分为四组：对照组（造模过程中用PBS替换P0 180-199肽段，第16天处死）、EAN小鼠造模结束后第8天处死组（EAN 8 d）、EAN小鼠造模结束后第16天处死组（EAN 16 d）、EAN小鼠药物干预并予造模结束后第16天处死组［初次免疫当天开始每日腹腔注射2脱氧-D-葡萄糖（2-DG），550 mg/kg，EAN 16 d+2-DG］，每组6只。对各组小鼠每日观察并记录临床症状，临床评分。观察结束时采用水合氯醛麻醉处死，收取各组小鼠血清、脾脏、坐骨神经等组织备用。坐骨神经HE染色及LFB染色观察炎性细胞浸润及脱髓鞘程度。流式细胞术检测M1型巨噬细胞比例，Th17细胞比例，Tregs细胞比例。RT-PCR检测糖酵解相关基因mTORC1、HIF1α、GLUT1、LDHA的mRNA表达水平。Western 印迹检测巨噬细胞及坐骨神经组织的泛-赖氨酸乳酸化水平。 结果:与对照组、EAN 8 d组及EAN 16 d+2-DG组相比，EAN 16 d组M1型巨噬细胞及坐骨神经糖酵解相关基因（mTORC1、HIF1α、GLUT1、LDHA）表达明显上调（均 P<0.05）；与对照组、EAN 8 d组及EAN 16 d+2-DG组相比，EAN 16 d组M1型巨噬细胞（1.25±0.02）及坐骨神经乳酸化修饰蛋白pankla相对水平（1.23±0.26）表达明显增加（M1型巨噬细胞：0.12±0.10、1.07±0.12、0.42±0.07，均 P<0.05；坐骨神经：0.10±0.12、0.87±0.20、0.36±0.05，均 P<0.05）。四组小鼠脾脏CD4+T细胞糖酵解基因（mTORC1、HIF1α、GLUT1、LDHA）表达比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。对照组、EAN 8 d组、EAN 16 d组及EAN 16 d+2-DG组脾脏M1型巨噬细胞比例分别为4.28±0.13、7.54±0.25、13.16±0.33、4.13±0.38，EAN 16 d组明显高于其他组（均 P<0.05）。四组小鼠脾脏Th17细胞比例分别为 3.78±0.03、8.24±0.55、12.30±1.34、4.83±0.01，EAN 16 d组明显高于其他组（均 P<0.05）。四组小鼠脾脏Tregs细胞比例分别为：10.01±1.05、7.54±0.70、3.82±0.47、8.22±1.21，EAN 16 d组明显低于其他组（均 P<0.05）。 结论:EAN小鼠发病过程中脾脏巨噬细胞糖酵解基因表达明显增强，CD4+T细胞糖酵解基因表达未见明显增强。脾脏M1型巨噬细胞、Th17细胞比例逐渐增加，Tregs细胞比例逐渐降低。