蓝莓VcILR1基因的克隆与表达分析

[目的]克隆蓝莓(Vaccinium spp)生长素酰胺水解酶基因VcILR1,分析该基因在蓝莓花、叶、茎、果和根中的表达模式和经过赤霉素处理的青果和成熟果两个时期的表达情况,为进一步探究该基因功能和蓝莓胚珠败育的机制提供依据.[方法]以蓝莓果实的cDNA为模板克隆得到VcILR1基因,利用ProtParam等工具对VcILR1进行生物信息学分析,利用qRT-PCR方法对VcILR1基因在蓝莓不同组织及赤霉素处理的青果和成熟果中的表达量进行分析.[结果]成功克隆到蓝莓VcILR1基因,该基因含 976 bp的开放阅读框(ORF),编码 325个氨基酸,有两个保守结构域,分别是Peptidase_M20和M20_dimer;编码蛋白的分子质量 35364.20 kDa,理论等电点 5.67,不稳定系数43.57,脂肪系数 88.55,亲水性平均值?0.054,属于不稳定亲水性蛋白.系统进化树分析表明蓝莓VcILR1基因与山茶科植物的茶树(Camellia sinensis)生长素酰胺水解酶(IAA-Leucine Resistant 1-like,ILL)基因亲缘关系较近.qRT-PCR分析结果显示,VcILR1在蓝莓花、叶、茎、果和根中均有表达,在叶片中表达量最高,具有组织特异性;赤霉素处理能上调果实中VcILR1的表达.[结论]赤霉素处理后蓝莓青果和成熟果中VcILR1的表达量均显著增高,推测赤霉素处理能够促进蓝莓果实中生长素含量的提高,从而抑制胚珠发育,导致果实无籽.