DNA甲基化参与LPS对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

利用脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立炎症细胞模型,采用RT-qPCR检测BMECs中炎症因子及AKT1 mRNA表达变化;采用BSP(Bisulfite sequencing PCR)检测AKT1基因启动子区域甲基化水平;采用组织细胞甘油三酯(Triglyceride,TG)含量酶法测定试剂盒检测细胞中甘油三酯含量;采用Bovine lactose ELISA KIT检测细胞中乳糖含量;采用Western blot技术检测β-casein、AKT1、P-AKT1、DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3A蛋白表达情况.试验结果表明,LPS诱导后奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯、乳糖和β-酪蛋白合成减少,AKT1表达量减少,P-AKT1蛋白表达量也减少,同时DNMT1和DNMT3A蛋白表达量增加,AKT1基因启动子甲基化水平升高,表明DNA甲基化参与乳腺炎条件下奶牛泌乳调控,LPS也通过促进DNA甲基转移酶表达提高AKT1基因甲基化水平而抑制AKT1表达,抑制乳脂、乳糖和乳蛋白合成.