表达马尔堡病毒囊膜糖蛋白重组水泡性口炎病毒的构建

为了构建携带eGFP标签并表达马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)囊膜糖蛋白(GP)的复制型水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)假型病毒,通过将VSV感染性克隆全长质粒中的G基因替换成马尔堡病毒的GP基因,与4个辅助质粒p3.1-VSV-N、p3.1-VSV-P、p3.1-VSV-L、p3.1-VSV-G共转染BSR细胞,拯救成功的重组VSV病毒传5代后,进行Western-blot、间接免疫荧光试验、RT-PCR鉴定和生长动力学曲线检测.显微镜检测结果显示,3个重组全长质粒分别与4个辅助质粒共转染BSR细胞培养48h后均能使细胞发生合胞体病变并伴有绿色荧光蛋白表达;Western-blot、间接免疫荧光试验鉴定结果显示,3株马尔堡病毒的囊膜糖蛋白在重组VSV病毒中正确表达;生长动力学曲线显示,3株重组VSV病毒的毒力相较于母本VSV病毒均降低,但病毒滴度依旧能达到1×106～1×107 TCID50 mL-1.结论:本研究成功构建3株携带eGFP标签表达MARV GP的复制型VSV假型病毒,为后续MARV疫苗与抗体的效果评价等奠定了基础.