羊口疮病毒安徽株116基因的生物信息学分析及原核表达

为了对羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)安徽株116基因进行生物信息学分析及原核表达.以ORFVAH-F10株为模板PCR扩增116基因,使用生物信息学软件预测该基因编码蛋白的结构与功能.同时将扩增产物克隆至pET-32a(+)原核表达载体,经BamHI及EcoR I双酶切鉴定后进行测序,构建pET-32a(+)-116重组质粒.转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)进行IPTG诱导,纯化蛋白后免疫BALB/c雌性小鼠制备多克隆抗体.测序结果显示,ORFV116基因全长561 bp,编码186个氨基酸.生物信息学分析结果显示:该蛋白分子量约为20.33 kDa,为不稳定亲水性蛋白;无信号肽、保守结构域及跨膜结构域;含有2个N糖基化位点和42个磷酸化位点;二级结构以无规则卷曲为主,分别为延伸链(5.91％)、α-螺旋(14.52％)与无规则卷曲(79.57％);预测该蛋白含有20个可能的B细胞优势抗原表位与4个CTL细胞表位.SDS-PAGE及Western-blot结果显示,ORFV116蛋白大小约为51 kDa,主要以可溶形式表达且具有良好的反应原性.