神经纤毛蛋白-1的干扰RNA通过诱导结直肠癌细胞p27核转位影响细胞自噬与凋亡水平的研究

目的 探究 RNA干扰神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞自噬与凋亡的影响及其机制.方法 将人结直肠癌细胞系 DLD-1 随机分为对照组、sh-NC 组、sh-NRP-1 组,进行慢病毒感染后收集各组细胞,实时荧光定量 PCR和 Western blotting测定细胞的感染效果,CCK-8 法检测细胞增殖活性,免疫荧光染色观察细胞内 p27 蛋白的亚细胞定位,Western blotting检测细胞质与细胞核内 p27 蛋白表达变化,透射电子显微镜观察细胞自噬情况,Western blotting检测细胞自噬相关蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 感染sh-NRP-1慢病毒液的细胞中NRP-1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著降低(P＜0.05);与对照组和sh-NC组比较,sh-NRP-1组细胞增殖活性显著下降,细胞核内p27 荧光染色明显增强,细胞质内p27 蛋白相对表达量显著下调,而细胞核内p27 蛋白相对表达量显著上调,可见较多双层膜的自噬小体,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1 蛋白表达显著上调而p62 蛋白表达显著下调,同时,细胞凋亡率显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA 干扰 NRP-1 能够抑制CRC细胞增殖活性,促进细胞自噬与凋亡,该作用可能与其调控 p27 蛋白的亚细胞定位有关.