模拟失重下miR-212-3p/SIRT1通路调控微血管内皮细胞增殖

目的 探究模拟失重下miR-212-3p/SIRT1信号通路对微血管内皮细胞增殖的影响,为失重导致的心血管功能失调的在体靶向干预寻求治疗靶点.方法 利用2D回转器对小鼠脑微血管内皮细胞进行模拟失重处理,探究miR-212-3p及沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(SIRT1)在模拟失重下的表达变化;向bEnd.3细胞中转染mimic-212-3p、inhibitor-212-3p、pcDNA3.1-SIRT1及相应的阴性对照进行功能验证或挽救实验;采用qRT-PCR检测miR-212-3p及SIRT1 mRNA表达变化;采用Western blotting检测PCNA、SIRT1蛋白的表达变化;采用CCK-8及5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)检测微血管内皮细胞增殖能力.结果 模拟失重下,bEnd.3细胞中miR-212-3p 表达升高、而 SIRT1 表达下降(P＜0.01);转染 mimic-212-3p、inhibitor-212-3p 后,Western blotting、CCK-8 及EdU检测均表明过表达miR-212-3p能够显著抑制微血管内皮细胞增殖,抑制miR-212-3p能够促进微血管内皮细胞增殖(P＜0.01);此外,沉默miR-212-3p可以缓解模拟失重导致的微血管内皮细胞增殖抑制,表现为模拟失重下转染inhibitor-212-3p后PCNA蛋白表达增加,细胞增殖率升高(P＜0.01);mimic-212-3p与pcDNA3.1-SIRT1共转染实验表明miR-212-3p通过抑制SIRT1从而负调控微血管内皮细胞增殖(P＜0.01).结论 模拟失重促进miR-212-3p表达,而抑制SIRT1表达;miR-212-3p通过直接负调控SIRT1从而抑制微血管内皮细胞增殖,提示抑制miR-212-3p/SIRT1通路可以部分降低模拟失重对微血管内皮细胞的增殖抑制,miR-212-3p可以作为潜在的干预靶点.