Hsa-miR-34a-5p调控NOTCH1抑制胃癌细胞增殖的机制研究

目的 评价hsa-miR-34a-5p通过调控Notch1表达抑制胃癌细胞增殖的机制研究.方法 以构建的过表达及敲低MIR34A基因的稳转SGC7901细胞为研究对象,MTT及流式检测MIR34A对SGC7901细胞增殖和细胞周期的影响;Western blot和qRT-PCR检测MIR34A对Notch1/PTEN/PI3K/Akt通路蛋白及mRNA表达变化;Western blot检测Notch1对PTEN/PI3K/Akt通路和增殖相关蛋白含量的影响;利用双荧光素酶报告基因实验检测MIR34A与Notch1的3'-UTR区域的结合作用;将18只雄性BALB/c裸鼠随机分为SGC7901-空载组(SGC7901-Ctrl)、SGC7901-MIR34A过表达组(SGC7901-MIR34A OE)和SGC7901-MIR34A敲低组(SGC7901-MIR34A KD),每组6只;每3天测量肿瘤生长情况;实验终点,解剖肿瘤并称重.结果 MIR34A可以抑制SGC7901细胞增殖并阻滞在S期,同时可以抑制体内SGC7901肿瘤的生长,降低肿瘤指数(P<0.05);明显降低Notch1/PTEN/PI3K/Akt蛋白及mRNA含量(P<0.05);过表达Notch1可以显著增加PTEN/PI3K/Akt通路蛋白、细胞增殖蛋白Ki67和PCNA的含量;MIR34A可以与Notch1的3'-UTR区域直接结合,显著抑制荧光素强度(P<0.05).结论 hsa-miR-34a-5p通过直接调控Notch1表达进而抑制胃癌细胞增殖.