感染唐鱼的草鱼呼肠孤病毒分离与鉴定

广东省某渔场待出境送检唐鱼(Tanichthys albonubes)样品,经病理检查未发现临床症状,取样品的肝、脾和肾等器官组织,用细胞分离培养方法检测病毒性因子,发现该批次唐鱼样品的组织提取物能够造成EPC和CHSE-214 细胞发生细胞病变效应(CPE),确定该样品携带病毒性病原.为探究唐鱼携带病原的种类,针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)S9核酸片段设计特异性引物,对产生CPE的细胞培养物进行RT-PCR核酸扩增和序列测定,用EPC细胞扩增该病毒,获得病毒含量为 106.25 TCID50/mL的细胞培养物,通过高通量测序技术分析细胞培养物中的病毒类型,并用不同病毒含量的细胞培养物进行唐鱼感染性试验.测序结果经BLAST比对分析发现,扩增序列与GCRV 873 株的S9 核苷酸序列同源性达 98％,鉴定病原为GCRV,将其命名为GCRV SZ0508 株.全基因组测序序列注释为GCRV,通过vp2 基因遗传进化分析发现,GCRV SZ0508 属于I型GCRV.感染性试验中,感染组 100％被感染,死亡率为 3.3％,表明分离的GCRV能够感染唐鱼,具有造成唐鱼发生草鱼出血病的风险.