CREB3通过下调FAK磷酸化水平抑制胶质瘤细胞增殖及侵袭转移的体外实验研究

目的:研究环磷酸腺苷反应原件结合蛋白3（CREB3）基因与胶质瘤患者的生存预后相关性，以及其在胶质瘤细胞增殖及侵袭转移等恶性生物学行为中的功能作用及发生机制，为寻找有效的胶质瘤分子治疗靶点提供理论依据。方法:CREB3的mRNA表达水平及其存活率来自中国胶质瘤基因组图谱（CGGA）数据库。免疫组化（IHC）验证在不同级别的人脑胶质瘤组织中CREB3和磷酸化部黏着斑激酶397位点（p-FAK397）蛋白的表达情况。慢病毒构建U87、U251的CREB3的敲低模型。利用蛋白质印记技术（WB）验证p-FAK和其通路上相关蛋白以及相关凋亡蛋白的表达情况。使用细胞增殖实验（CCK-8）计算细胞在450 nm出的光密度（OD）及平板克隆实验验证敲低慢病毒敲低CREB3后细胞的增殖能力，利用细胞划痕，Transwell实验验证敲低细胞系的迁移和侵袭的能力。结果:根据CGGA数据库，发现CREB3在高级别胶质瘤中表达上调，提示预后不良（P＜0.05）。IHC表明随着胶质瘤级别的增高CREB3表达随之增加，而p-FAK（397）则在Ⅳ级胶质瘤中明显表达。构建慢病毒敲低CREB3的U87、U251细胞系通过WB表明可以使p-FAK（397）的表达下降，促凋亡蛋白（BAX）表达增加，抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达减少（P＜0.05），并且可以在体外抑制胶质瘤的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05）。结论:CREB3在高级别胶质瘤组织中表达增高，且与患者生存预后密切相关。敲低CREB3下调胶质瘤细胞中FAK的磷酸化水平，进而介导胶质瘤细胞的增殖及侵袭迁移能力变弱。