甲基苯丙胺损伤神经系统双链DNA的作用研究

目的 探讨甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)损伤不同类型神经细胞双链DNA的情况.方法 体外实验,分别培养原代皮质神经元、HT-22 细胞、BV2 细胞、HMC3 细胞和U-87 MG细胞,分别给予METH后,观察细胞形态和用Western blot检测各组细胞表达γ-H2AX的水平.体内实验,建立METH腹腔注射小鼠模型,应用旷场实验进行小鼠行为学分析.HE染色观察小鼠前额叶皮质和海马内神经细胞的形态变化,用IF观察两个脑区内双链DNA损伤情况,用Western blot检测两个脑区表达γ-H2AX的水平.结果 体外实验,给予METH后,原代皮质神经元、HT-22 细胞、BV2 细胞、HMC3 细胞和U-87 MG细胞形态发生明显变化,细胞突触变短或消失,胞体皱缩,间隙增宽.各组细胞表达γ-H2AX水平明显升高.体内实验,给予METH后,与生理盐水组相比,小鼠运动极其活跃,运动轨迹和路程明显增加.HE染色结果显示前额叶皮质和海马内神经元明显水肿,嗜酸性增强,部分神经元变性改变.IF结果显示,与生理盐水组相比,METH组前额叶皮质和海马内神经细胞发生双链DNA损伤的数量明显增多,且荧光强度明显增强.Western blot结果显示,与生理盐水组相比,METH组前额叶皮质和海马组织表达γ-H2AX水平明显升高.结论 METH可损伤神经系统双链DNA.METH可诱导原代皮质神经元、HT-22 细胞,BV2细胞、HMC3 细胞和U-87 MG细胞以及小鼠前额叶皮质和海马组织表达γ-H2AX水平明显增高.该研究可为阐明METH诱导神经毒性作用机制提供理论依据.