卵清蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,以用于流感疫苗中OVA含量的测定.方法 以兔抗OVA多克隆抗体作为包被抗体,HRP标记的兔抗OVA多克隆抗体作为检测抗体建立OVA双抗体夹心ELISA检测方法.对包被抗体浓度(2、1、0.5、0.25μg/mL)、酶标抗体浓度(0.5、0.25、0.125pg/mL)、封闭液(1％BSA、2％BSA、1％BSA+1％蔗糖、2％BSA+2％蔗糖,以未封闭为对照)进行优化,并确定Cut-off值作为判断标准.对方法的线性范围及检测下限、特异性、重复性和准确度进行验证.结果 该方法的最适检测条件为:包被抗体浓度1 μg/mL,酶标抗体浓度0.25μg/mL;封闭液为2％BSA+2％蔗糖;Cut-off值为0.051 66.该方法线性范围为5-0.313 ng/mL,检测下限为0.078 ng/mL;与流感病毒、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、Vero细胞上清液等均不发生反应;板内变异系数(CV)在2.562％-13.887％之间,板间CV在4.000％-16.497％之间;该方法检测结果与德国SERAMUN OVA定量检测试剂盒检测结果的符合率在93.79％-107.05％之间.结论 建立的OVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、重复性、线性范围及准确度,且操作简便、成本低,可用于OVA的定量检测.