虾肝肠胞虫水通道蛋白基因EHP00_492的克隆与表达特征分析

[目的]克隆虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)水通道蛋白编码基因EHP00_492,分析其在EHP成熟孢子中的表达特征,为研究EHP水通道蛋白的功能提供理论基础.[方法]以虾肝肠胞虫为材料,克隆获得完整的EHP00_492 基因,对其进行序列特征分析,构建pCold-TF-EHP00_492 重组表达载体,转化至大肠杆菌中异源表达重组蛋白,制备兔多克隆抗体.利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光实验分析EHP00_492 在EHP成熟孢子中的表达定位特征.[结果]EHP00_492 的编码基因全长 729 bp,由 242 个氨基酸组成,富含亮氨酸,预测分子量为 25 kD,无信号肽,含有 6 个跨膜结构域,具有MIP蛋白家族结构域和 2 个水通道蛋白保守的NPA/G基序.此外,EHP00_492 与其他微孢子虫水通道蛋白序列同源性较高,系统进化树分析结果显示,EHP00_492 与毕氏肠胞虫EBI_27080 蛋白亲缘关系最近.AlphaFold分析发现,EHP00_492与已鉴定的家蚕微孢子虫水通道蛋白NbAQP和兔脑炎微孢子虫水通道蛋白EcAQP的蛋白质三维结构高度相似,推测EHP00_492是一个潜在的水通道蛋白.蛋白免疫印迹结果显示,EHP00_492蛋白在EHP成熟孢子中有表达,分子量为 21 kD.亚细胞定位分析结果显示,EHP00_492 蛋白定位于EHP成熟孢子的孢壁上.[结论]初步明确了EHP00_492 蛋白的序列特征、结构特征及其与其他微孢子虫水通道蛋白的亲缘关系,以及其在EHP成熟孢子中的表达定位特征,可为进一步研究EHP水通道蛋白的功能提供基础.