miR-29c-3p/IGF1分子轴对肝星状细胞活化,增殖和凋亡的作用机制

目的 探讨miR-29c-3p通过IGF-1对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化,增殖和凋亡的影响.方法 原代培养小鼠HSCs,并通过免疫荧光检测HSCs标志物α-SMA表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c-3p和IGF-1的靶向关系.TGF-β 激活HSCs,并且外源性调控miR-29c-3p和IGF-1的表达水平后,分别采用Westernbolt,CCK-8,克隆形成实验和流式细胞术检测活化HSCs中活化相关蛋白(α-SMA,DDR2,FN1,ITGB1和GFAP)的表达,增殖,克隆形成数和凋亡.结果 α-SMA阳性表达表明成功分离小鼠HSCs.miR-29c-3pmimic可降低野生型IGF-1的荧光素酶活性,但是对突变型IGF-1没有影响.过表达miR-29c-3p和低表达IGF-1能减少α-SMA,DDR2,FN1和ITGB1表达,增加 GFAP的表达,并且降低HSCs的增殖活力和克隆形成数,上调其凋亡比例.结论 miR-29c-3p通过靶向抑制IGF-1表达,进而抑制HSCs活化和增殖,并促进其凋亡.