适合早期诊断的非洲猪瘟sIgA抗体量子点免疫层析检测方法建立

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒感染引起的一种烈性猪传染病,其极高的传染性和发病率给养猪产业造成了巨大的经济损失.目前尚无安全有效的ASF疫苗,因此早期监测是防控ASF最重要的解决方案之一.建立敏感、快速的ASF现场即时检验方法,对维护生猪产业繁荣具有重要意义.首先基于氨基和羧基的偶联反应制备量子点微球(quantum dot microsphere,QDM)偶联ASFV重组抗原蛋白p30的检测探针和QDM-兔抗鸡IgY质控探针;接着在检测线和质控线分别固定鼠抗猪IgA-Sc片段抗体和鸡IgY蛋白制备侧向流免疫试纸条;待检动物口腔液中的ASF sIgA抗体经QDM-p30捕获可被固定至T线.将ASFV阳性口腔液以2倍梯度稀释,检测该方法的灵敏度.通过检测其他几种常见猪病病毒验证该方法的特异性.通过检测ASFV阴性和阳性动物的口腔液临床样本评价该方法的临床诊断效能.该方法特异性好,与PRV、CSFV、PRRV不存在交叉反应;灵敏度高,最低检出稀释度可达1∶64;耗时短,可在20 min内完成检测;操作便捷,无需侵入式采样;检出时间早,人工感染最早可于感染后第6天检出.本研究开发了一种口腔液中ASF sIgA抗体的现场即时检验(point-of-care testing,POCT)量子点免疫试纸条,为ASFV的监测和防控提供了新的技术支持和补充.