蓝舌病病毒NS4蛋白亚细胞定位对Ⅰ型干扰素应答的影响

在前期仙台病毒诱导干扰素通路基因表达的研究基础上,通过免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察,分析蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)NS4蛋白在仙台病毒诱导下表达及亚细胞定位特征;通过双荧光素酶报告系统和ELISA方法分析NS4蛋白对Ⅰ型IFN-β启动子活性的影响,Western blot分析对NS4 IFN通路中MDA5、TRAF6和ISG15蛋白表达的影响.免疫荧光共聚焦显微镜观察及Western blot结果显示,发现在仙台病毒诱导下在HEK 293T细胞内转染pcDNA3.1-NS4-eGFP重组质粒48 h时发现强的绿色荧光信号,至72 h时绿色荧光信号主要集聚于细胞核内;Western blot分析结果显示在转染后的24,48及72 h NS4蛋白的表达量呈时间依赖性上调表达,且在48和72 h抽提的细胞核蛋白中检测到大量的NS4重组蛋白;双荧光素酶报告系统试验显示NS4能显著抑制IFN-β启动子活性,ELISA结果显示NS4能显著抑制IFN-β蛋白的表达;Western blot分析干扰素信号通路 MDA5、TRAF6及ISG15蛋白的表达,结果显示,NS4蛋白表达可下调SeV诱导的IFN信号通路中TRAF6、ISG15蛋白表达;灰度分析显示NS4表达极显著下调ISG15的表达.结果表明BTV NS4重组蛋白呈明显的核内定位特征,具有拮抗Ⅰ型IFN应答功能,为进一步研究BTV NS4蛋白拮抗宿主天然免疫应答的分子机制研究提供参考.