基于JNK信号通路探讨五首活血化瘀方对心血瘀阻证新西兰兔内皮细胞的保护作用差异

目的:探讨五首活血化瘀方对心血瘀阻证新西兰兔主动脉内皮细胞的保护作用差异.方法:将80只新西兰兔随机分为正常组(10只)和造模组(70只),造模组采用"饥饿+高脂饲料+肾上腺素法"复制新西兰兔心血瘀阻证模型,造模成功后随机分为模型组、血府逐瘀汤组(3.55 g·kg-1·d-1)、桃红四物汤组(2.66 g·kg-1·d-1)、丹参饮组(1.962 g·kg-1·d-1)、活络效灵丹组(2.80 g·kg-1·d-1)、失笑散组(0.56 g·kg-1·d-1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组(SP600125,5μg·kg-1),其中正常组和模型组灌胃等量蒸馏水,五首活血化瘀方组灌胃相应复方,SP600125组注射SP600125二甲基亚砜稀释液0.5 mL.治疗结束后取出主动脉,原位末端标记法(TUNEL)检测主动脉内皮细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉组织JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉组织JNK、Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达水平.结果:五首活血化瘀方均可不同程度地改善主动脉内皮细胞凋亡,其中血府逐瘀汤、桃红四物汤效果最好,活络效灵丹次之,失笑散稍弱,丹参饮、SP600125最差(P＜0.05,P＜0.01).五首活血化瘀方均可明显降低TNF-α、IL-6含量(P＜0.05,P＜0.01),下调JNK、p-JNK、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01),下调JNK、Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达水平(P＜0.05,P＜0.01),上调Bcl-2蛋白及mRNA表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:五首活血化瘀方均可减轻心血瘀阻证新西兰兔主动脉内皮细胞凋亡,但作用强度存在差异,这可能与五首活血化瘀方对JNK信号通路的作用不同有关.