禽传染性支气管炎病毒N蛋白保守B细胞抗原表位的鉴定

应用噬菌体随机十二肽库技术对针对IBV GX-YL5株N蛋白的单抗N2D5进行抗原表位的鉴定.将淘选得到的噬菌体随机十二肽库第3轮洗脱液进行二代测序,将测序结果中出现频率最高的3个十二肽序列合成肽后验证是否为模拟表位;根据获得的模拟表位预测相应的天然表位序列并合成多肽和原核表达进行验证,同时对获得的天然表位进行保守性和交叉反应性分析.结果显示,第3轮筛选洗脱液测序出现频率最高的3个序列中有2个为模拟表位,即 VVGRAMAYSTIP和DGVLLGTSGEST;预测天然表位序列为158IPLNRGRGGRST169;预测天然表位的合成肽的ELISA和Dot-blotting分析以及其原核表达蛋白的Western-blotting分析表明,158IPLNRGRGGRST169是IBV的一个天然表位序列;保守性和交叉反应性分析显示该天然表位具有高度保守性.结果表明,本研究成功鉴定出IBV GX-YL5 N蛋白上的一个高度保守的表位158IPLNRGRGGRST169,为IBV N蛋白的抗原结构和功能的研究及诊断试剂和表位疫苗的研制奠定了基础.