为探明湖北荆州某养殖场吉富罗非鱼(Genetic Improvement of Farmed Tilapia,GIFT)致病原因,对感染的罗非鱼精准施治,本研究从湖北荆州某养殖场患病吉富罗非鱼脑组织分离到一株优势菌.结果显示:该菌在BHI平板上生长出光滑、圆形、白色菌落,显微镜观察发现细菌呈单个、成对或球形短链状,长短不一,且革兰氏染色为阳性.经16S rRNA序列、PCR鉴定和生理生化特性鉴定,确定分离菌株为罗非鱼无乳链球菌,命名为JZ-202108.分离菌株JZ-202108血清型为Ⅰa型,携带gapC、sodA、bac、bca和hly等5种毒力基因.分离菌株JZ-202108人工感染吉富罗非鱼的症状与自然发病症状类似,出现神经症状和严重的内脏出血现象,并从脑组织中分离到强毒株,其LD50为3.4×105 CFU/尾,对吉富罗非鱼致病性较强.药物敏感性实验表明,分离菌株JZ-202108对β-内酰胺类、头孢类药物敏感,对氨基酸糖苷类药物耐药;乌梅、黄连、朱砂、野菊花等中药对JZ-202108菌株有明显抑制作用,乌梅和野菊花在菌株JZ-202108感染吉富罗非鱼的体内治疗效果最佳.生产中可考虑用β-内酰胺和头孢类抗菌药物,以及中药乌梅和野菊花等药物进行治疗.
长江是中国水生生物的摇篮,大保护的核心要求在于处理好保护与发展的关系,要点是水生态优化和水资源合理利用.为助力长江渔业资源保护与利用,以2000-2019年《淡水渔业》期刊中发表的S93水产资源类论文为对象,梳理和汇总论文数据积累、发文热点等,为未来长江大保护具体措施的制定和实施提供理论支持和参考.从发文量、一级主题论文占比和渔业资源类评估及生境监测论文总被引状况等来看,《淡水渔业》在刊载文章内容上一直都非常重视长江渔业资源保护与利用主题高水平论文的选择,已发表的渔业资源保护与利用学科论文能帮助研究者和政策决策者了解当前长江渔业资源与环境现状,指导长江大保护规划制定;同时通过后续追踪这些高被引论文,有助于刊物本身对"长江大保护"研究新热点的挖掘,形成新的全面、科学、合理的指导意见.
为探究急性高温胁迫对黑龙江茴鱼(Thymallus arcticus grubei)生理适应性的影响,采用生物化学和分子生物学的方法研究了急性高温下(11、14、17℃和20℃)黑龙江茴鱼血清生化指标、消化酶和抗氧化酶等变化规律.结果显示:急性高温胁迫过程中,黑龙江茴鱼血清生化指标发生显著变化.其中,17℃组和20℃组血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性随胁迫时间的增加显著升高,血清中总蛋白(TP)含量和碱性磷酸酶(ALP)活性则随胁迫时间的延长呈下降趋势.黑龙江茴鱼肠道淀粉酶和蛋白酶活性随高温胁迫时间的增加呈先上升后下降的变化趋势.在高温胁迫24 h时,17℃组和20℃组黑龙江茴鱼肠道的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均显著高于对照组;于胁迫48 h时,其肠道淀粉酶和蛋白酶活性显著降低,而脂肪酶活性显著增加.此外,黑龙江茴鱼肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽抗氧化物酶(GPX)活性随高温胁迫时间的延长显著升高,而过氧化氢酶(CAT)活性则在高温胁迫48 h时显著下降.肝脏中SOD和CAT基因相对表达量在急性高温胁迫下显著上调表达.研究结果表明,在急性高温处理下黑龙江茴鱼在17～20℃下处于胁迫状态,其血清生化指标、消化酶、抗氧化酶活性及其基因表达受到显著影响.
为了解我国水产品中氯芬新残留状况,本研究采用QuEChERS样品进行前处理技术,建立了鱼中氯芬新残留高效液相色谱-串联质谱检测方法,并利用该技术首次对采自5个省市13个品种128个鱼类样品中氯芬新残进行检测;分别参照欧盟规定的氯芬新在鲑中最大残留限量1350μg/kg,以及在部分动物源性食品中最大残留限量20μg/kg,采用风险熵值法(RQ)进行氯芬新残留食用安全性风险分析.研究结果显示:氯芬新在0.5～100.0 ng/mL浓度范围内线性关系良好,线性相关系数(r2)大于0.995,检出限为1.0μg/kg.在1.0、2.0、5.0、50.0μg/kg四个添加水平上进行加标回收实验,平均回收率在79.16％ ～106.33％ 之间,相对标准偏差在1.63％ ～7.26％之间(n=6).在鳙、鲤、鲫、鲟、虹鳟、鲢、鳊、鳜和大菱鲆中均未检出氯芬新残留,表明这些品种的鱼类氯芬新残留食用风险很小.在加州鲈、草鱼、大黄鱼和乌鳢中氯芬新最大残留含量分别为343.02、58.43、33.19μg/kg和1.38μg/kg,检出率分别为37.21％、29.41％、40.00％和16.67％.据欧盟动物源性食品中氯芬新最大残留限量,乌鳢氯芬新残留食用为低风险,草鱼、大黄鱼和加州鲈均为高风险,其中加州鲈RQ值是风险值的17倍之多.综上结果表明在我国部分鱼类养殖过程中可能存在较为严重的氯芬新违规使用现象,存在较高氯芬新食用安全风险.
为了解乌苏里拟鲿(Pseudubagrus ussuriensi)精子的生理特性,提高乌苏里拟鲿人工受精率,探究了不同Na+浓度、K+浓度、温度和pH对乌苏里拟鲿精子活力的影响.结果显示:Na+浓度为50 mmol/L时,乌苏里拟鲿精子活力最强,快速运动时间为(33.0±5.7)s,寿命时间为(67.3±10.4)s,激活时整体运动剧烈;K+浓度为45 mmol/L时,精子活力最强,快速运动时间为(32.7±9.3)s,寿命时间为(68.2±12.6)s,当K+浓度为100 mmol/L或以上时,精子完全失活;当温度在4～21℃时,乌苏里拟鲿精子活力较强,随着温度的升高,精子活力变化不明显,当温度高于21℃时,精子活力降低,寿命时间缩短;pH为8时,精子活力最强,快速运动时间和寿命时间分别为(31.5±5.6)s、(65.3±6.9)s,精子运动剧烈.研究表明,适宜浓度的Na+和K+对乌苏里拟鲿精子活力有增强作用,精子适宜的保存温度是4℃,人工授精时,水环境适宜温度在21℃左右,pH为7.0～8.0.
为探究不同生境条件下细菌群落结构特征及其对沉积物重金属污染的响应,在三峡库区及上游共4个江段,采集21个表层沉积物样品,利用高通量测序技术研究其细菌群落结构和多样性,并利用冗余分析和相关性分析等方法分析重金属与细菌群落结构和多样性之间的响应关系.结果显示:研究江段沉积物细菌群落共检出65门179纲446目784科和1926属;优势菌门为变形菌门(Proteobacteria),优势菌纲为γ-变形菌纲(Gamma-proteobacteria),其相对丰度分别为42.35％ ～54.56％和12.65％ ～28.30％;细菌群落多样性表现为:库区江段>库区上游江段,但没有显著差异;重金属As、Pb、Cr和Cu含量与绿弯菌门(Chloroflexi)相对丰度呈显著正相关,与厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度呈显著负相关.
底栖硅藻是水体生态系统中的重要初级生产者,由于其对环境具有敏感性,可用做水体生态系统的指征生物,因此底栖硅藻生物多样性调查工作尤为重要.本研究于乌梁素海的底栖硅藻调查中发现了中国曲丝藻属新记录种—温泉曲丝藻(Achnanthidium thermalis Rabenhorst).结合光学显微镜和电子显微镜进行观察,发现该种具备曲丝藻属基本特征,又因其具有中央区两侧线纹不对称,仅一侧线纹延伸至壳缘的特征,我们将其鉴定为温泉曲丝藻.进一步分析电子显微镜下该种特征,发现其具有典型的双列线纹,而曲丝藻属的常见种类线纹特征通常为单列线纹.依照分类依据,将其鉴定为温泉曲丝藻.
为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能,本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率.苏丹黑染色3 dpf(days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量;qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子.结果显示:chac1是母源基因,在受精后0～3 hpf(hours post fertilization)时其表达量较高,之后随着母本基因的影响逐渐变小,chac1的mRNA表达量下降;在斑马鱼成鱼中,其在肌肉、卵巢、脑中高表达;此外,突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比,其苏丹黑染色阳性信号更多;chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调.综上,chac1为母源基因,其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调.
种植植物的人工湿地可以通过根系分泌物及根际泌氧显著提高其对养殖尾水处理的性能.而不同植物种类和环境会影响根系分泌物释放情况,本实验通过搭建三组垂直流人工湿地处理养殖尾水,分别为无植物(NP)、风车草组(FCC)、鸢尾组(YW).检测其根系分泌情况并分析其与污染物去除率间的相关性.样品中检测到并且具有CAS号(CAS Registry Number)的化合物共有84种,其中鸢尾有82种,风车草有24种.鸢尾组检测出的柠檬酸的相对浓度为(62.3±9.65)μg/mL,为检测出的相对浓度最高的根系分泌物,且其与NO3--N和TN的去除率呈显著的正相关.种植植物组对NO2--N的去除效果更稳定且显著高于NP组;种植植物组对NO3--N的去除率显著高于NP组,YW组显著高于FCC组,其中L-苯丙氨酸、柠檬酸等根系分泌物与NO3--N的去除率呈正相关;对NH4+-N和TN的去除率,种植植物组均显著高于NP组,其中FCC组对NH4+-N的去除率高于YW组,分泌物L-缬氨酸和胆碱与NH4+-N的去除率呈正相关.本研究利用高效液相色谱串联质谱技术较为全面地检测了风车草与鸢尾的根系分泌物组成情况,为应用根系分泌物强化人工湿地提供了理论参考.
为掌握中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)亲蟹放流时的生态需求特征,利用Loligo systems装置测定饥饿期亲蟹的耗氧率和饥饿状态下最大耐流速度,并对不同水流速度处理1h后测定亲蟹的肌肉、肝胰腺和鳃组织的琥珀酸脱氢酶(SDH)、丙酮酸激酶(PK)和己糖激酶(HK)活性.结果显示:在饥饿4 d后,亲蟹耗氧率趋于稳定,不同水流速度下亲蟹耗氧率均具有显著性差异,且亲蟹最大耐流速度为40 cm/s.肌肉和鳃中SDH活性在20 cm/s和30 cm/s水流速度下明显高于静止组;肌肉中PK和HK活性以及肝胰腺中PK活性在各流速组明显高于静水组.因此,在亲蟹人工放流时可选择水流速度较慢且食物充足的水域进行放流,减少自身能量的消耗,有效提高存活率.
为科学制定虹鳟(Oncorhynchus mykiss)杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)病的给药方案,对3株分离自虹鳟的杀鲑气单胞菌采用纸片扩散法(K-B法)进行24种抗生素耐药性测定,并对其中4种敏感且批准使用的抗生素进行体外药效学实验,研究20、30、40和60 mg/kg盐酸多西环素在染病虹鳟体内的药代动力学特征.结果显示:3株杀鲑气单胞菌对复方新诺明、磺胺异恶唑、青霉素、阿莫西林、头孢唑林耐药,对盐酸多西环素最敏感,其最小抑菌浓度(MIC)为0.5μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)在2～4μg/mL之间,防耐药突变浓度(MPC)为1μg/mL;恩诺沙星的MIC在0.25～1μg/mL之间,MBC为4μg/mL,MPC为1.5μg/mL;氟苯尼考的MIC为1μg/mL,MBC为8μg/mL,MPC为2μg/mL;硫酸新霉素MIC为4μg/mL,MBC为8μg/mL,MPC为12μg/mL.40 mg/kg剂量单次给药,盐酸多西环素在患病虹鳟血浆中的峰浓度为1.19μg/mL,达峰时间为4 h,且血药浓度维持在MIC以上16 h,可以满足虹鳟杀鲑气单胞菌病治疗需要.60 mg/kg剂量单次给药,盐酸多西环素在患病虹鳟血浆、肌肉、肾脏和肝脏中药物浓度维持在MIC以上的时间分别为23、18、23.5和23.5 h,在患病虹鳟血浆、肾脏和肝脏中药物浓度维持在MPC之上的时间分别为6、23.5和23.5 h,此使用剂量既能达到虹鳟杀鲑气单胞菌治疗作用,又能有效防止产生耐药性.
为探明湖北克氏原螯虾(Procambarus clarkii)不同养殖群体形态特征差异,本研究通过多元统计分析,对湖北省主养区7个克氏原螯虾群体的形态指标进行分析,结果显示鄂州与江陵群体间的欧式距离最短.基于主成分分析,雌雄克氏原螯虾的前4个主成分累计贡献率分别是86.10％和87.31％,7个群体之间存在一定的差异,体重、头胸甲长、腹长、尾扇长以及第一腹节宽呈现显著性差异,是引起形态差异的主要因素.判别分析显示,7个群体雌性群体判别准确率最高的是江陵群体(83.3％),最低的是石首群体(40.0％),雄性群体判别率最高的是监利群体(90.9％),最低的同样是石首群体(56.7％).综上结果表明,不同养殖地区克氏原螯虾在形态上有一定的分化.
为探究重金属铬在水环境中的致毒机理和生态风险,本实验开展不同浓度Cr6+(0、0.1、0.75、1.5、2.25和3 mg/L)对受试生物普通小球藻(Chlorella vulgaris)的急性毒性实验,分析藻密度、叶绿素a(Chl-a)含量、多糖含量、蛋白(TP)含量、活性氧自由基(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、细胞膜通透性、总抗氧化(T-AOC)能力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)含量、植物螯合肽(PCs)含量和吸附效率等指标的影响.研究结果表明在96 h内Cr6+各浓度组均会抑制藻细胞的生长,其中3 mg/L处理组抑制率最高,为57.32％,96 h-IC50为2.067 mg/L.叶绿素a(Chl-a)含量和藻细胞生物量的变化呈现一致性,3 mg/L处理组最低,仅为对照组的26.60％.藻细胞胞内多糖和TP含量随着胁迫浓度的升高而降低.胁迫浓度的增加诱导了ROS含量的升高,3 mg/L浓度组ROS水平为对照组的6倍,MDA含量呈现相同趋势.此时藻细胞受到氧化损伤,细胞膜通透性显著增强,抗氧化体系受到激活,T-AOC、T-SOD、PCs和GSH酶活性在3 mg/L浓度组时分别为对照组的2.89倍、3.4倍、6.37倍和2.35倍.低浓度0.1 mg/L时重金属吸附率最高,高达76.00％.
为了解人工鱼礁的投放对南四湖微山湖浮游植物群落结构的影响,分别于2021 年10 月(秋季)及2021 年12 月(冬季)对人工鱼礁区和对照区浮游植物群落结构进行调查.调查结果显示:微山湖共鉴定出8 门66 属143种;其中绿藻门种类最多,为64 种,占总种数的44.76%,且两次调查中各区域优势种均以蓝藻门和绿藻门为主.秋季对照区、塑料礁区和水泥礁区浮游植物密度分别为 1304.17×104、3026.30×104 和 4154.82×104 cells/L,多样性指数分别为 2.99、2.71 和 2.67;冬季对照区、塑料礁区和水泥礁区浮游植物密度分别为2091.46×104、1639.52×104 和1286.47×104 cells/L,多样性指数分别为2.52、2.51 和2.54.结果表明,人工鱼礁的投放促进了浮游植物的生长繁殖,但随着鱼礁投放时间的延长,鱼礁内存在淤泥堆积的现象,减弱了其对浮游植物生长繁殖的促进作用.Pearson相关性分析表明,影响微山湖人工鱼礁区浮游植物群落结构的主要环境因子,秋季为CODMn、TP、NO-3-N、T、DO;冬季为TN、TP、NH3-N、NO-2-N、DO、SD.
为研究14 个不同养殖群体的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)遗传多样性及遗传结构,采用 8 对多态性微卫星引物对14 个群体的209 尾个体进行遗传多样性和遗传结构分析.结果显示:14 个群体的平均等位基因数在 8～10 之间,平均有效等位基因在 5.160～6.882 之间,平均观测杂合度在 0.633～0.717 之间,平均期望杂合度在0.358～0.749 之间,平均多态信息含量在0.594～0.681 之间,均大于0.5.分子方差分析结果表明:3.69％的遗传变异来自群体间,3.93％来自群体内个体间,92.38％来自所有个体间,变异来源主要来自个体间,其中RB群体和WH群体的遗传分化最大(Fst =0.116),ZL群体和XB群体的遗传分化最小(Fst =-0.009).基于遗传距离构建了UPGMA系统树,发现14 个群体共分为 5 个聚类支,HJ、YZ、YH、YB 4 个群体聚为一支,HQ和LG单独各自聚为一支,LZ和RB2 个群体聚为一支,DB、ZJ、WH、XH、XB和ZL6 个群体聚为一支.基于贝叶斯的Structure聚类分析同样支持14 个黄颡鱼群体可分为5 个聚类支,与聚类树的结果吻合.14 个黄颡鱼群体的遗传多样性均处于高度多态水平,遗传分化处于低等分化水平.
为探明遵义金鼎镇合江源养殖场患病黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)的致病原因,通过对患有腹水、鳍条充血和游动缓慢等症状的黄颡鱼进行了病原菌分离纯化,得到纯培养菌株MLT-1,经过回归感染证实其为黄颡鱼的致病菌,经生理生化和16S rDNA鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria).同时采用乙醇提取法获得30 种中草药醇提物,固体培养基打孔测试中药醇提物对MLT-1 的抑菌作用,结果显示:诃子、大黄、烟叶、樟叶、桑白皮5 种中草药对MLT-1 的抑菌效果较好,诃子和大黄的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)均为 0.49 mg/mL,烟叶的MIC和MBC均为0.98 mg/mL,樟叶和桑白皮抑杀温和气单胞菌效果相同,MIC和MBC分别为0.195 mg/mL和3.91 mg/mL.结果表明诃子、大黄、烟叶、樟叶、桑白皮5 种中草药可用于防治黄颡鱼温和气单胞菌细菌病.
为了给三峡库尾重庆市主城区段次级河流、其他城市化河流的健康评价提供快速有效的方法,本实验在位于三峡库尾重庆主城区段的嘉陵江一级支流梁滩河流域布置监测点位,同步采集大型底栖动物和环境因子,利用大型底栖动物快速生物评价指数进行河流健康评估研究.结果显示:梁滩河共采集到大型底栖动物 58 种,Shannon-Wiener指数在0.06～2.23 内,流域主要优势类群为耐受污染的寡毛类和摇蚊科种类,呈典型的城市化河流特征;PCA分析结果表明两轴共解释了59.3％的环境变异,表明水温(T)、硝酸盐(NO-3)、溶解氧(DO)、氧化还原电位(ORP)是影响梁滩河的关键环境因子;初步筛选的4 大类共8 个快速生物评价指数中,物种数(S)和BMWP指数呈极显著相关性,且均与其他指数相关性不显著,其余指数间相关性均达到显著水平;回归分析表明,除BPI指数、jFD指数、BP指数外,其余5 种评价指数与T、NO-3、ORP、pH等部分指标表现出较高的相关性,在不同程度上均可以较显著地反映人类活动对流域水质的影响;综合分析后,筛选出物种数S、GBI指数和FBI指数共同构建综合评价指数进行综合评价,评价梁滩河总体健康状况为"理想状况～病态",总体上与综合水质标识指数法评价结果变化规律相似,但由于流域总体污染水平较高(各点位水质均在Ⅴ类以上)而各点位评价结果差异较大.选定的指数也较为适合与梁滩河地形地貌、城市化水平较为接近的其他三峡库尾次级河流.
为探明引起彭水县某鲟养殖场杂交鲟(Acipenser baerii ♀×A.schrencki♂)患病的病原,本研究从患病杂交鲟的腹水中分离出一株细菌(A20).通过菌落形态观察、革兰氏染色、溶血性实验、生理生化特征、16S rDNA基因和gyrB基因序列分析对菌株A20 进行鉴定,同时探究菌株A20 的耐受性、毒力基因、半致死浓度和药物敏感性等生物学特性.结果显示:菌株A20 鉴定为气单胞菌属(Aeromonas spp.)短杆状革兰氏阴性菌温和气单胞菌(A.sobria);菌株A20 生长的最适pH为7,对温度和盐度的耐受力较强;该菌携带hlyA、ompA、alt、aer 4 种毒力基因;人工回归感染实验结果表明菌株A20 为导致杂交鲟患病的病原菌,LD50 为1.37×107 CFU/mL;药敏结果表明,该菌对氟苯尼考、恩诺沙星等15 种抗菌药物敏感.
为建立鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus,EeCV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据EeCV复制相关蛋白(replication-associated protein,RAP)基因的保守序列设计特异性引物,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果.qPCR的阈值循环数(Cycle threshold value,Ct 值)与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广(1.0×108～102拷贝数/μL);可特异性检测EeCV,而对鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus)、猪圆环病毒(Porcine circovirus)、鸭圆环病毒(Duck circovirus)无扩增;重复性强,组内和组间变异系数均小于3％;灵敏性高于普通PCR法10 倍.且qPCR检测后发现,在感染EeCV的鳗鲡体内重要器官均可检测到EeCV,其中鳃的病毒量显著高于其他组织;对保存的 44 份疑似鳗鲡病毒性感染病料进行检测,阳性检出率为 98％,而普通PCR法的阳性检出率为73％.
三峡库区为四大家鱼提供了广阔的肥育场所,在长江四大家鱼资源保护中具有非常重要的作用.目前关于库区四大家鱼种群结构和生长状况还不清楚,不利于其资源保护.2019 年 8 月-2020 年 8 月对三峡库区鲢(Hypophthalmichthys molitrix)的资源现状进行了调查,采集了 388 尾样本,分析了其年龄结构与生长特征.结果显示:采集到的鲢体长为100～805 mm,其中84.54％的鲢分布在100～400 mm;体质量为14.8～9166.3 g,其中82.22％的鲢分布在1.0 kg以下;年龄组成为1～7 龄,其中90.98％的鲢为1～3 龄.三峡库区鲢体长(L)与体重(W)呈显著的幂函数关系:W=8×10-6L3.1389(n =388,R2 =0.981),为匀速生长类型.体长与鳞径(R)呈显著的线性函数关系:R=0.0062L-0.0834(n=388,R2 =0.951).体长、体重生长方程分别为:Lt=1014.50[1-e-0.1783(t+0.0455)];Wt=21848.11[1-e-0.1783(t+0.0455)]3.1389.拐点年龄为ti=6.4龄,对应的体长、体重分别是:Lt=693.03 mm,Wt=6605.67 g.与历史数据相比,三峡库区鲢种群表现出小型化趋势,主要体现在小个体鱼比例增加以及生长速度减慢.
