Momordica antiviral protein 30 kD(MAP30)is a type Ⅰ ribosome-inactivating protein(RIP)with antibacterial,anti-HIV and antitumor activities but lacks the ability to target tumor cells.To in-crease its tumor-targeting ability,the arginine-glycine-aspartic(RGD)peptide and the epidermal growth factor receptor interference(EGFRi)peptide were fused with MAP30,which was named ELRL-MAP30.The efficiency of targeted therapy for triple-negative breast cancer(TNBC)MDA-MB-231 cells,which lack the expression of estrogen receptor(ER),Progesterone receptor(PgR)and human epidermal growth factor receptor-2(HER2),is limited.In this study,we focus on exploring the effect and mecha-nism of ELRL-MAP30 on TNBC MDA-MB-231 cells.First,we discovered that ELRL-MAP30 significant-ly inhibited the migration and invasion of MDA-MB-231 cells and induced MDA-MB-231 cell apoptosis.Moreover,ELRL-MAP30 treatment resulted in a significant increase in Bax expression and a decrease in Bcl-2 expression.Furthermore,ELRL-MAP30 triggered apoptosis via the Fak/EGFR/Erk and Ilk/Akt signaling pathways.In addition,recombinant ELRL-MAP30 can inhibit chicken embryonic angiogenesis,and also inhibit the tube formation ability of human umbilical vein endothelial cells(HUVECs),indica-ting its potential therapeutic effects on tumor angiogenesis.Collectively,these results indicate that ELRL-MAP30 has significant tumor-targeting properties in MDA-MB-231 cancer cells and reveals potential ther-apeutic effects on angiogenesis.These findings indicate the potential role of ELRL-MAP30 in the targeted treatment of the TNBC cell line MDA-MB-231.
Background Different basal media have very different effects on cell growth, proliferation and differentiation potential of cultured human umbilical cord mesenchymal stem cell (hUC-MSC). This issue has not gotten enough research. The goal of this study is to select high safety and low cost basal media for hUC-MSC, which performs best in combination with commercial human platelet lysate product for cell proliferation and differentiation functions, especially suitable for high-passage hUC-MSC cultures. Methods Three different basal media were combined with 5% UltraGROGAdvanced to culture P0 to P8 passage hUC-MSC. Cell morphology, cell expansion ratio, proliferation, differentiation and cell surface markers were examined and analyzed in order to draw conclusions. Results When observing the same passage under different culture systems, the number of cells obtained in MSCBM and α-MEM were higher than that cultured in IMDM (0.01 < P < 0.05). The results between MSCBM and α-MEM were not significantly different (P > 0.05). Combining growth curve measurement and cell doubling time calculation, it was found that the cell proliferation functions of the three culture media were ranked as MSCBM, α-MEM and IMDM from high to low. The P8 cells cultured in different media all yield good clonal formation, and also all differentiated well. The number of cells differentiated into osteoblasts and chondrocytes cultured in different media was not significantly different (P > 0.05), while the number of adipocyte differentiation in MSCBM and α-MEM cultures were significantly higher than that of IMDM culture (0.01 < P < 0.05). The cells in all cultures uniformly express high levels of MSC surface markers CD73, CD90, CD105, and negatively express CD34, CD45. Conclusions Taking all indicators into consideration, we conclude that the culture system of MSMBM supplemented with 5% UltraGROGAdvanced is the best for culturing hUC-MSC withα-MEM follows right after. This study revealed the importance of basal media in MSC cultures, and offer guidance on their selective use.
目的 探讨抗生素(antibiotic,ATB)联合抗程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD1)抗体免疫治疗对小鼠肝癌疗效的影响.方法 建立雄性BALB/cH22荷瘤小鼠模型,于建模后腹腔注射抗PD1抗体(250μg/只)免疫治疗,同时给予小鼠灌胃头孢曲松钠(100 mg/kg)+盐酸林可霉素(200 mg/kg),设灌胃生理盐水的正常对照组(0.2 mL/只),每组8只.通过小鼠肿瘤体积、肿瘤组织的苏木素-伊红(HE)染色和脾指数评估ATB与抗PD1抗体联合治疗的抗肿瘤效果;ELISA法检测小鼠血清中IL-2、IL-10、IFNγ细胞因子分泌水平;流式细胞术分析小鼠淋巴细胞中CD3+和CD8+T细胞比例;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法检测小鼠肿瘤组织中CD3和CD8表达水平.结果 ATB与抗PD1抗体联合治疗对肿瘤生长有显著抑制作用,上调了T淋巴细胞中CD3+和CD8+T细胞比例及IL-2、IL-10、IFNγ细胞因子分泌水平;通过上调肿瘤组织中CD3和CD8表达水平来调节T细胞免疫功能,以持续激活免疫系统,抑制肿瘤.结论 窄谱ATB可能通过改善免疫功能以促进抗体免疫治疗对肿瘤的抑制效果.
铅(Pb)毒性是影响全球数百万人的公共卫生问题,临床研究发现脑膜瘤的重要危险因素是铅暴露.同时在脑膜瘤患者体内常能发现由NF2基因编码的Merlin蛋白缺失.但是铅暴露如何调节脑膜瘤细胞的发生发展目前研究仍无定论.本研究旨在分析铅暴露对脑膜瘤细胞的增殖、细胞体积、迁移侵袭能力的影响以及其潜在分子机制.结果显示,醋酸铅可抑制脑膜瘤细胞IOMM-Lee的Merlin蛋白表达、促进细胞的增殖和迁移侵袭能力、mTOR分子磷酸化增加,而Merlin蛋白外源过表达则可逆转醋酸铅介导的细胞增殖迁移侵袭能力增加、mTOR磷酸化分子增加.该结果提示,铅暴露可通过Merlin-mTOR信号通路促进脑膜瘤细胞IOMM-Lee的增殖和迁移侵袭.
细胞焦亡(pyroptosis)又称细胞炎性坏死,是Gasdermin蛋白家族介导的一种程序性细胞死亡,表现为细胞不断肿胀直至细胞膜破裂,导致细胞内容物释放,进而激活强烈的炎症反应.近年来,细胞焦亡在肿瘤发病机制中的作用变得越来越突出,焦亡信号通路分子及细胞焦亡过程中释放的多种炎症介质与肿瘤的发生、发展及对肿瘤化疗和免疫治疗的反应密切相关.由于肿瘤的异质性,细胞焦亡在不同肿瘤中的作用并不相同,因此有必要研究细胞焦亡在不同肿瘤中的具体作用机制.从药理学角度,寻求促进生成炎症小体或激活焦亡通路的分子底物,为肿瘤药物的研发和治疗提供更多思路.细胞焦亡在一定程度上也解答了肿瘤化疗和免疫治疗副作用产生的原因.细胞焦亡在肿瘤治疗过程中是"双刃剑",如何调节药物在肿瘤组织、正常组织和免疫微环境中诱导细胞焦亡的方式和程度,对于提高肿瘤的化疗和免疫治疗效果,降低毒副作用具有重要的意义.本文就细胞焦亡的类型及分子机制,细胞焦亡在肿瘤的发生发展及其在肿瘤化疗、放射治疗、中药治疗和免疫治疗过程中发挥的作用进行综述,以期为临床肿瘤治疗和预后分析提供新靶点.
目的 探讨螺旋藻藻蓝蛋白对乙醇致氧化应激小鼠抗氧化能力的影响.方法 将48只雌性KM小鼠随机分为空白、模型、低剂量、高剂量组,每组12只.低、高剂量组小鼠经灌胃分别给予藻蓝蛋白0.15和0.30 g/kg体质量,1次/d,连续灌胃42 d,称量小鼠体质量;末次灌胃后禁食16 h(过夜),1次性灌胃50％乙醇,12 mL/kg体质量,模型组小鼠仅进行50％乙醇灌胃,空白组不灌胃.6 h后经摘眼球采血,分离血清,相应试剂盒检测8-表氢氧异前列腺素(8-iso-prostane)含量.无菌取各组小鼠肝组织,经研磨离心后,取上清,相应试剂盒检测蛋白质羰基、谷胱甘肽抗氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)含量,并分析小鼠体质量与GSH的相关性.结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量增加,但差异无统计学意义(F=1.585,P＞0.05);血清中8-isoprostane、肝组织中蛋白质羰基和GSH含量均显著升高(F分别为11.697、13.582、17.213,P均＜0.05);肝组织中GSH-Px含量下降,但差异无统计学意义(F=5.978,P＞0.05).与模型组比较,低、高剂量组小鼠体质量明显下降(F分别为4.125和18.842,P均＜0.05);血清中8-isoprostane及肝组织中蛋白质羰基含量均明显降低(F=10.695～40.512,P均＜0.01);肝组织中GSH-Px和GSH含量均显著提高(F=42.654～76.379,P均＜0.01).小鼠肝组织中GSH含量与小鼠体质量呈负相关(R2=0.013 49,P＞0.05).结论 藻蓝蛋白可降低乙醇至氧化应激小鼠的氧化损伤,提高抗氧化能力,同时可降低小鼠体质量.
血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)最主要的致病因素,降脂治疗是预防和管理ASCVD的主要方式之一.前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)可通过升高低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、炎性反应等促进动脉粥样硬化,而PCSK9抑制剂可靶向降低PCSK9水平,降脂效率高.联合他汀类或依折麦布治疗的基础上,还能带来更多的临床效益,随着研究的不断深入,已成为近年降脂药研究的热点.本文就PCSK9抑制剂的研发进展作一综述,以期为该类药物的临床应用提供参考.
目的 在大肠埃希菌(E.coli)中表达登革病毒(dengue virus,DENV)NS2B-NS3蛋白酶,对表达条件进行优化,并测定酶活性,为抗DENV药物先导化合物的筛选与发现奠定基础.方法 将密码子优化的NS2B-NS3基因连接到pET-28a载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a-NS2B-NS3,转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导NS2B-NS3蛋白酶表达.通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度,确定NS2B-NS3蛋白酶在E.coli中的最佳表达条件.使用HisTrapTM亲和层析柱分离纯化NS2B-NS3蛋白酶,通过荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)试验测定酶活性.结果 重组原核表达质粒pET-28a-NS2B-NS3经双酶切(Nhe Ⅰ/Xho Ⅰ)及测序证明构建正确.NS2B-NS3蛋白酶在E.coli中的最佳表达条件为:诱导温度20℃,诱导时间10 h,IPTG浓度0.2 mmol/L,表达量达20 mg/L.纯化的NS2B-NS3蛋白酶纯度大于90％,可与小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性结合,且具有良好的水解活性,其比活力为16 111 U/mg、米氏常数(Km)值为16.46 μmol/L、催化常数(kcat)值为0.028/s.结论 成功制备了高纯度、高活性的DENV NS2B-NS3蛋白酶,为NS2B-NS3蛋白酶抑制剂高通量筛选模型的建立奠定了实验基础.
目的 建立用于检测汉逊酵母活性和活力的荧光素二乙酸酯(carboxyfluorescein diacetate,CFDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色法.方法 通过单因素试验,优化CFDA的染色时间(5、10、20、40、60、120 min)、工作液浓度(50、100、200、300 μmol/L)及 PI 的染色时间(5、10、15、20、25 min)、工作液浓度(2、10、20、30 μmol/L).采用最适条件检测理论存活率为0、25％、50％、75％和100％的汉逊酵母样品,荧光显微镜下观察荧光信号,ImageJ软件分析灰度值;计数存活及死亡细胞个数,计算实际存活率和实际死亡率.同时分析实际灰度值、实际存活率及实际死亡率与相应理论值的相关性.采用建立的CFDA-PI双荧光染色法检测3批汉逊酵母培养物的活性及活力.结果 CFDA和PI的最佳染色时间为60和5 min,最佳工作液浓度为200和2μmol/L.不同理论存活率汉逊酵母样品的实际灰度值、实际存活率及实际死亡率与相应理论值均具有显著相关性(R2=0.998 3～0.999 2,P＜0.05).3批汉逊酵母培养物活性及活力3次检测值的CV分别为3.20％～4.03％和1.10％～2.27％.结论 成功建立了用于检测汉逊酵母活性和活力的CFDA-PI双荧光染色法,可用于相关研究中汉逊酵母活性和活力的快速检测.
目的 采用新一代Illumina/Solexa测序平台对黄热减毒活疫苗(鸡胚细胞)毒种在基因组水平进行质量控制.方法 将黄热减毒活疫苗YF17D-204毒株接种原代鸡胚细胞,筛选鸡胚细胞黄热减毒活疫苗适应株,建立YFV17D-CEC三级毒种库;提取各级毒种病毒基因组RNA,制备RNA文库,采用新一代Illumina/Solexa测序平台进行高通量 RNA测序,采用 FastQC、Trimmomatic、SPAdes、GapFiller、PrInSeS-G、Prokka、RepeatMasker、CRT、NCBI Blast+、KAAS、HMMER3、TMHMM,SignalP,LipoP、ProtCamp、MegAlign等生物学软件,对黄热病毒全基因组核酸序列进行基因组系统化分析.结果 YFV17D-CEC三级毒种库全基因组全长为10 862个核苷酸,其中119～10 354位(10 236 bp)为1个开放阅读框,编码3 412个氨基酸.序列比对分析显示,YFV17D-CEC三级毒种库序列与YFV17D RKI(JN628-279.1)、YF/Vaccine/USA/Sanofi-Pasteur-17D-204/UF795AA/YFVax(JX503529.1)YFV17D-204(KF769015.1)同源性均为100％,三级毒种库全基因组未发生突变.比较黄热减毒活疫苗不同疫苗株序列发现,黄热病毒具有多个多态性位点.结论 YFV17D-CEC在原代鸡胚细胞上具有良好的遗传稳定性.利用高通量RNA测序技术可快速检测YFV17D-CEC三级毒种库全基因组信息,序列分析数据可对黄热疫苗毒种库进行基因水平的质量控制.
目的 对国内外鼻喷流感减毒活疫苗(live attenuated influenza vaccine,LAIV)给药装置喷雾特性进行对比.方法 采用激光衍射法测定国内外两种鼻喷给药装置雾化颗粒粒径分布(DV10、DV50、DV90)、＜10 μm雾滴占比、Span跨度,Spray view仪器检测喷雾模式[最大直径(Dmax)、最短直径(Dmin)、椭圆率(ovality,Dmax/Dmin)]和喷雾几何形态(喷雾角度及宽度),并进行比较分析.结果 国内外两种鼻喷给药装置雾化颗粒的DV10、DV50、DV90粒径分布、＜10 μm雾滴占比及Span跨度差异均无统计学意义[莱文方差等同性检验F分别为0.622、0.135、3.067、0.212、0.058,P分别为0.434、0.714、0.085、0.647、0.810,且假定等方差显著性(双尾)值分别为0.439、0.228、0.281、0.539、0.910];喷雾模式的Dmax、Dmin、ovality差异均无统计学意义[莱文方差等同性检验F分别为2.102、2.666、0.514,P分别为0.158、0.114、0.479,且假定等方差显著性(双尾)值分别为0.651、0.407、0.160];喷雾角度及宽度的平均值比值分别为0.92和0.91,均在0.90～1.11范围内.结论 国内外鼻喷给药装置均满足鼻喷LAIV的鼻喷给药要求,可用于鼻喷疫苗和药物的递送.
目的 对制备的第九批候选人用狂犬病疫苗国家标准品的效价进行协作标定,并最终赋值.方法 组织人用狂犬病疫苗生产、研发等有资质的实验室,以第七批狂犬病疫苗国际标准品(NIBSC代码:16/204)为检测标准品,采用NIH法对候选狂犬病疫苗国家标准品进行效价测定.对协作标定单位的检测结果进行统计学分析,取有效检测值的几何均值作为候选标准品的最终效价值.根据国家药品标准物质制备的要求,对该候选标准品进行热加速破坏后检测糖蛋白抗原,考察其稳定性.结果 参加协作标定的单位有20家,剔除未严格按照协作标定SOP操作的2家,剩余协作单位数据均有效,经统计学分析,第九批狂犬病疫苗国家标准品效价最终赋值为11.4IU/mL,95％可信限为10.9～11.9 IU/mL,ED50的95％参考范围为2.10～2.75.37 ℃放置不同时间(2、4、8和16周)糖蛋白抗原检测结果未见明显差异.结论 完成了第九批候选人用狂犬病疫苗国家标准品(批号:201906001)的协作标定,其效价赋值科学、严谨、数据可靠,热稳定性符合要求.目前该标准品已获得国家药品标准物质委员会批准使用,对人用狂犬病疫苗的质量控制,尤其是有效性的质控具有重要意义.
目的 建立恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证.方法 以SARS-CoV-2 Beta变异株灭活疫苗为包被抗原建立特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,并优化方法的抗原包被浓度(1、2、4μg/mL)、待检血清稀释度(1∶800～1∶12 800)、PBST封闭液(含 1％BSA、2％BSA、1％脱脂奶、2％脱脂奶、1％BSA+1％脱脂奶)、封闭时间(30、60、90min)、二抗稀释度(1∶5 000、1∶10000、1∶15000、1∶20000)、血清及二抗孵育时间(30、60、90 min)、TMB显色反应时间(5、10、15、20、25、30 min).采用建立的方法检测60份恒河猴阴性血清,确定阴、阳性临界值.验证该方法的敏感性及精密性.采用建立的方法及微量中和试验分别检测44份恒河猴血清抗SARS-CoV-2 Beta变异株特异性IgG抗体及中和抗体水平,并比较二者的相关性和一致性.结果 确定最佳检测条件:抗原包被浓度为1 μg/mL;封闭液为含1％脱脂奶粉的PBST,封闭时间为30 min;待检血清稀释度为1∶1600,孵育时间为90min,二抗稀释度为1∶10000,孵育时间为30min;底物显色时间为25 min.该方法的阳性临界值为0.093,阴性临界值为0.084,位于两者之间判为可疑.5份阳性血清测得阳性结果的血清稀释倍数均为1∶51 200;精密性验证变异系数(CV)均＜15％.44份恒河猴血清IgG抗体效价与中和抗体水平之间呈强相关(r=0.858 0,P＜0.0001);两种方法总符合率为90.9％,阳性符合率为93.6％,阴性符合率为84.6％;一致性检验Kappa为0.783 8(95％CI:0.586 5～0.981 0).结论 建立的恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性和精密性,与微量中和试验具有较强一致性,可用于恒河猴血清IgG抗体的检测.
免疫治疗细胞因子制剂在抗感染、抗肿瘤、抗排斥反应、自身免疫疾病以及组织修复等方面具有重要临床价值,但由于早期细胞因子类制剂体内半衰期短、非特异性以及不利的生物分布引起的不良反应,限制了其临床应用.随着人类对细胞因子-受体相互作用的原理及细胞因子介导的信号通路的深入了解,利用细胞因子工程化进行修饰已成为一种有效的细胞因子设计路线.本文主要对细胞因子的工程化设计技术,如重组细胞因子的设计、靶向、递送和mRNA表达、细胞技术,以及未来细胞因子工程化可能的发展方向及其临床转化过程中面临的挑战等作一综述,旨在为细胞因子基因工程化技术的研发提供相关技术参考.
目的 评价冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)(简称狂犬病疫苗)上市后在≥18岁人群中暴露前免疫接种的安全性及免疫原性.方法 2022年6-9月选择贵州省和山西省≥ 18岁人群作为研究对象.受试者分别按0、7、28 d各接种1剂狂犬病疫苗,于第1剂疫苗接种前及接种第3剂后14 d静脉采血5.0 mL.采用免疫荧光灶试验进行狂犬病病毒中和抗体检测,收集每剂疫苗接种后0～7d不良事件.结果 共120人完成入组,其中120人完成第1剂狂犬病疫苗接种,119人完成第2剂狂犬病疫苗接种,118人完成第3剂狂犬病疫苗接种.局部不良事件症状以疼痛为主,全身不良事件症状以发热、疲劳/乏力、头晕、关节痛、腹泻为主.接种第1剂狂犬病疫苗前抗体阳性率为2.54％,抗体几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC)为0.40 IU/mL.完成3剂疫苗接种后,抗体阳性率和阳转率均为 100％,抗体GMC 为 9.68 IU/mL,抗体几何平均增长倍数(geometric mean increase,GMI)为23.99.接种第 1、2、3剂狂犬病疫苗0～7 d的不良事件发生率分别为22.50％、13.45％和4.24％.结论 狂犬病疫苗上市后在≥ 18岁人群中开展暴露前免疫具有良好的安全性及免疫原性.
目的 建立8种鼠源性病毒的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,Q-PCR)检测方法,并进行验证.方法 通过4个实验室验证Q-PCR法的特异性、灵敏度及精密性,同时进行病毒模拟污染试验及盲样检测,并将检测结果进行比对.采用Q-PCR法检测26批SARS-CoV-2疫苗生产用单抗细胞株及15批其他鼠源性制品.结果 用于8种鼠源病毒检测的Q-PCR法与同科同属或其他鼠源病毒无交叉反应;除实验室2对鼠痘病毒(又名脱脚病病毒)(ectromelia virus,EctV/Mouse Pox,MPV)检测的灵敏度为2× 102 copies/μL外,实验室2对其他7种病毒及其他3个实验室对8种鼠源性病毒的检测灵敏度均为2 × 101copies/μL;除实验室3对鼠腺病毒(mouse adenovirus,MAdV)检测拷贝数试验间CV为37.58％外,实验室3对其他7种病毒和其他3个实验室对8种病毒检测的试验内、试验间Ct和拷贝数CV均＜25％.病毒模拟污染试验检测灵敏度均符合参数要求;4个实验室盲样检测结果符合率为100％.26批SARS-CoV-2疫苗生产用单抗细胞株及15批其他鼠源性制品8种鼠源病毒检测结果均为阴性.结论 鼠源性病毒的Q-PCR法具有良好的特异性、灵敏度及精密性,可用于鼠源性生物制品的检测.
目的 对SLC33A1基因的理化性质、结构功能、蛋白相互作用以及不同物种间的同源性进行生物信息学预测分析,为SLC33A1功能的进一步研究提供参考.方法 利用多种不同的生物信息学工具,对SLC33A1基因的理化性质、亲疏水性、信号肽结构、跨膜结构、亚细胞定位、三维空间结构、翻译后修饰位点、蛋白相互作用等进行预测分析.结果 SLC33A1蛋白是一种中性稳定蛋白,具有疏水性,不存在信号肽序列,主要分布于细胞膜及膜结构细胞器,在囊泡膜的概率为13.0％;SLC33A1蛋白序列有11个跨膜结构域,6个胞外结构域,6个胞内结构域;SLC33A1蛋白三级结构弹性较大,空间结构比较稳定,拥有2个N-糖基化位点、2个O-糖基化位点及13个可能的蛋白激酶磷酸化位点;SLC33A1与ATM等7个蛋白具有高置信度的相互作用关系;SLC33A1主要参与肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE 1)介导的未折叠蛋白应答的负调控、鞘糖脂、唾液酸化、细胞对γ射线的反应、内质网应激反应的负调控等生物学过程.结论 利用多种软件对SLC33A1的性质及功能进行了深入了解,为抗癌新靶点的进一步研究提供了思路及理论支持.
目的 评价以壳聚糖为佐剂的白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)疫苗对小鼠的免疫效果,为DT新型佐剂疫苗的制备提供实验依据.方法 将30只雄性C57BL/6小鼠分为黏膜免疫组和体液免疫组,每组再随机分为6组:阴性对照组(PBS)、阳性对照组(DT)、铝佐剂组、壳聚糖佐剂组(配成含壳聚糖0.5％的终溶液)、铝佐剂疫苗组和壳聚糖佐剂疫苗组,每组5只.黏膜免疫组和体液免疫组分别通过滴鼻和腹腔注射接种1次,PBS缓冲液500μL/只,DT 10 μg/只,铝佐剂500 μg/只,壳聚糖佐剂500μL/只.观察小鼠状态,并分别于接种前(0 d)、接种后7、21、35 d采集小鼠眼球血清,同时收集鼻洗液,采用ELISA法分别检测血清IgG抗体水平和鼻洗液sIgA抗体水平.结果 小鼠腹腔注射及鼻滴壳聚糖佐剂疫苗后,精神及行为状态正常.壳聚糖佐剂疫苗可有效诱导小鼠产生白喉IgG抗体,与经典铝佐剂疫苗组相比,免疫后35 d差异无统计学意义(F=0.742＜F0.05(1 8),P＞0.05);也可有效诱导小鼠产生sIgA,免疫后21 d明显高于经典铝佐剂疫苗组(F=127.926＞F0.05(1.8),P＜0.05).结论 壳聚糖佐剂DT疫苗安全性良好,可有效诱导小鼠黏膜免疫和体液免疫,具有替代铝佐剂制备疫苗的潜力,且可考虑制备鼻滴疫苗.
目的 探讨枸杞糖肽(Lycium barbanun glycopeptide,LbGP)对放射诱导人角质形成细胞HaCaT损伤的保护作用及其机制.方法 采用直线加速器(速率6 Gy/min)分别按4、8、12、16、20、24、28 Gy剂量对HaCaT细胞进行照射,CCK-8法检测细胞活性.以0、0.05、0.1、0.5、0.8、1.0、1.5、3mg/mL的 LbGP作用 HaCaT细胞4h,进行 12 Gy剂量放射,CCK-8法检测细胞活性.将HaCaT细胞分为空白对照组(不加LbGP不放射)、放射组(12 Gy剂量照射)、LbGP+放射组(0.8 mg/mLLbGP作用24 h,12 Gy剂量照射),照射1 h后,流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生量,WST-8法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blot法检测细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)、p-Nrf2、NADPH 氧化还原酶 1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平;分别于放射1、3、5h后,qRT-PCR法检测Nrf2、HO-1、NQO1基因mRNA的转录水平.结果 12 Gy放射辐射量可诱导约50％细胞死亡,0.8 mg/mL LbGP对放射细胞活性保护作用最佳.放射1h后,与空白对照组比较,放射组HaCaT细胞内ROS含量显著增加(F=2.55,P＜0.001),SOD活力显著降低(F=1.23,P＜0.01),NQO1、Nrf2蛋白含量差异无统计学意义(F分别为1.78和1.00,P均＞0.05),HO-1蛋白含量明显增加(F=1.37,P＜0.05),p-Nrf2蛋白含量显著下降(F=2.75,P＜0.01);与放射组比较,LbGP+放射组HaCaT细胞内 ROS含量明显降低(F=3.61,P＜0.001),SOD活性明显升高(F=1.23,P＜0.05),Nrf2,p-Nrf2、HO-1 及NQO1蛋白含量均显著上升(F分别为4.00、2.25、6.25及1.27,P均＜0.05).放射1、3、5 h,与放射组比较,LbGP+放射组Nrf2、HO-I、NQO1基因mRNA转录水平均明显升高(F=0.20～36.00,P均＜0.05).结论 LbGP可减轻放射对HaCaT细胞的氧化应激损伤,保护细胞活性,该作用可能是通过激活Nrf2及提高其下游抗氧化酶SOD、HO-1、NQO1水平而发挥作用的.
目的 评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strains,sIPV)制剂处方优化后产品质量.方法 对制剂处方优化(无酚红、无抑菌剂)后sIPV产品进行质量属性评估,并与已上市sIPV产品进行质量可比性分析;将制剂处方优化前后成品同时肌内免疫270只Wister大鼠(雌雄各半),检测大鼠血清中和抗体水平,进行免疫原性评价和可比性分析;将制剂处方优化后成品分别置37 ℃、室温(20～25 ℃)和2～8 ℃进行加速和长期稳定性试验,检测关键指标D抗原含量,进行稳定性评价,并与已上市产品历史数据进行可比性分析.结果 制剂处方优化后的sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量、蛋白质含量、pH、Vero细胞蛋白质残留量、牛血清白蛋白残留量、Vero细胞DNA残留量、游离甲醛含量等各项检定结果均符合《中国药典》三部(2020版)要求和企业标准,工艺优化前后质量属性一致,免疫原性一致,加速及长期稳定性趋势一致.结论 制剂处方优化后的sIPV不再含有酚红和抑菌剂成分,制剂安全性得到提升;与优化前相比,产品质量属性、免疫原性及稳定性高度相似;产品有效期内各项指标均符合要求,且具有良好的稳定性.
