目的 探讨穿透素3(PTX3)、可溶性髓系细胞受体-1(sTREM-1)、细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)在细菌性脓毒症患者血清中的水平变化及诊断价值.方法 本研究选取2019年1月至2022年12月在本院治疗的细菌性脓毒症患者94例作为观察组,同期选取非感染性全身性炎症性反应综合征(SIRS)患者80例及健康体检志愿者100例分别纳入对照组和健康组.检测血清PTX3、sTREM-1、SOCS3水平;受试者工作特征曲线(ROC)评价血清PTX3、sTREM-1、SOCS3水平对细菌性脓毒症患者的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析法分析细菌性脓毒症的影响因素.结果 观察组患者血清PTX3、sTREM-1、SOCS3表达水平分别为(104.39±23.93)ng/mL、(136.17±41.46)ng/mL、(346.59±31.12)μg/L,高于对照组患者血清PTX3、sTREM-1、SOCS3表达水平(53.93±12.19)ng/mL、(69.17±14.46)ng/mL、(271.19±26.02)μg/L及健康组患者血清PTX3、sTREM-1、SOCS3表达水平(1.17±0.33)ng/mL、(10.15±3.17)ng/mL、(163.32±17.33)g/L,三组间比较差异均有统计学意义(F=5.928,588.015,11.785,P＜0.05);ROC结果显示,血清PTX3、sTREM-1、SOCS3水平预测细菌性脓毒症患者的曲线下面积(AUC)分别为0.867、0.878、0.893,对应的敏感度分别为90.43％、78.72％、81.91％,特异度分别为86.25％、88.75％、90.00％,三者联合预测细菌性脓毒症患者的AUC为0.957,敏感度为92.55％,特异度为85.00％;Logistic回归分析显示PTX3、sTREM-1、SOCS3水平升高均是细菌性脓毒症的危险因素.结论 PTX3、SOCS3、sTREM-1在细菌性脓毒症患者血清中均呈明显高表达,三者联合检测有助于诊断疾病的发生.
目的 检测细菌性脑膜炎(BM)患者脑脊液、血清中lncRNA NEAT1水平变化情况,并分析其与患者病情严重程度以及血脑屏障破坏程度的相关性.方法 收集2015年2月-2021年12月间本院收治的BM患者66例作为BM组,另选取同期不具备神经系统感染性疾病但具有腰穿指征的同期住院患者40例作为对照组.根据中枢神经系统功能障碍程度将患者分为普通BM组与重症BM组,收集患者入院48 h内脑脊液与血清标本,qRT-PCR法检测脑脊液与血清标本中lncRNA NEAT1水平,比较对照组、BM组间以及普通BM组与重症BM组间脑脊液与血清标本中lncRNA NEAT1水平;根据白蛋白指数对BM患者血脑屏障破坏程度进行分级,比较普通BM组与重症BM组血脑屏障破坏程度;Pearson法分析脑脊液lncRNA NEAT1、血清lncRNA NEAT1、白蛋白指数间相关性.结果 与对照组相比,BM 组患者脑脊液(3.28±0.51 vs 1.01±0.18)、血清 lncRNA NEAT1 水平(2.51±0.42 vs 1.01±0.16)均升高(P＜0.05),且BM组患者血清与脑脊液中lncRNA NEAT1水平比较差异有统计学意义(P＜0.05);与普通BM患者相比,重症 BM 患者脑脊液 lncRNA NEAT1(3.62+0.53 vs 2.82±0.46)、血清 lncRNA NEAT1(2.70±0.46 vs 2.25±0.37)水平升高(P＜0.05),且普通BM、重症BM患者血清与脑脊液中lncRNA NEAT1水平比较差异有统计学意义(P＜0.05);普通BM患者、重症BM患者血脑屏障损伤程度之间比较差异有统计学意义(P＜0.05);BM患者脑脊液、血清lncRNA NEAT1均与白蛋白指数呈正相关(P＜0.05),BM患者脑脊液lncRNA NEAT1与血清lncRNA 结论 BM患者脑脊液、血清中lncRNA NEAT1高表达,其水平与患者严重程度、血脑屏障损伤程度密切相关,为BM患者的诊疗提供了靶点.
目的 探讨天麻素(Gas)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺炎大鼠肺组织的保护机制及对Th17/Treg细胞平衡的影响.方法 将Wistar雄性大鼠60只分为对照组(C组)、模型组(M组)Gas低剂量组(Gas-L,5 mg/kg)、Gas中剂量组(Gas-M,10 mg/kg)、Gas高剂量组(Gas-H,20 mg/kg)、阳性组(0.15 g/kg利巴韦林),每组10只.药物干预结束后,称定大鼠体质量和肺组织干湿重,计算肺指数和肺组织W/D值;取肺组织作HE染色检查并进行损伤评分;qRT-PCR检测肺组织RSV病毒载量;流式细胞术检测脾组织Th17、Treg细胞比例;ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A、TGF-β含量;Western blot检测肺组织Notch/NF-KB通路蛋白表达.结果 与C组相比,M组肺组织出现中性粒细胞浸润,肺泡破裂连片等病变,肺指数、W/D值、肺损伤评分、RSV病毒载量、Th17细胞比例、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平、Notch-1、Hes-1、-NF-KB p65/NF-KB p65蛋白均显著升高(均P＜0.05),Treg细胞比例和TGF-β水平均显著下降(均P＜0.05).Gas-M、H组和阳性组肺损伤程度显著改善,肺指数、W/D值、肺损伤评分、RSV病毒载量,Th17细胞比例,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17 及 Notch-1、Hes-1、p-NF-κB p65/NF-κB p65 蛋白水平均显著下降(均 P＜0.05),Treg细胞比例和TGF-β水平显著上升(均P＜0.05).结论 Gas具有减轻RSV感染肺炎大鼠的肺组织炎症损伤和维持Th17/Treg细胞平衡的作用,可能通过抑制Notch/NF-κB信号通路实现.
目的 克隆羊口疮病毒020基因,构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞,分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位,分析该蛋白生物信息学特征.方法 提取羊口疮病毒基因组,PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒,转染HeLa细胞,采用Western blot检测其在该细胞中的表达,免疫荧光法检测该蛋白的亚细胞定位.利用DNAstar软件分析不同毒株ORFV E3L氨基酸序列特点及其遗传演化关系;利用SOMPA软件分析其二级结构;利用SignalP4.0软件预测信号肽;利用TMHMM2.0软件预测跨膜结构;利用NetPhos 3.1预测磷酸化位点;利用NetNGlyc-1.0预测糖基化位点;应用IDEB和SYFPEITHI预测ORFV E3L蛋白的抗原表位.结果 成功克隆得到ORFV 020基因,全长549 bp,编码183个氨基酸;亚细胞定位显示该蛋白定位于细胞核和细胞质.生物信息学分析ORFV E3L蛋白α螺旋约占40.44％、β折叠约占5.46％、延伸链约占16.94％、无规则卷曲约占37.16％;该蛋白无信号肽和跨膜结构,可能存在15个磷酸化位点,7个N-糖基化位点,5个B细胞线性表位,2个CTL表位,3个Th细胞表位,3个B细胞和CTL联合表位,3个B细胞和Th细胞联合表位.结论 ORFV E3L蛋白定位于细胞核和细胞质,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性.该蛋白高度保守,具有成为优势保护性抗原的潜力.为进一步揭示ORFV E3L蛋白的功能奠定基础,为ORFV诊断方法的建立及疫苗的研制提供了理论依据.
目的 探究干扰Wnt5a对卡介苗(BCG)感染的小鼠肺上皮细胞(TC-1)炎性反应的调控作用,并阐明其作用机制.方法 慢病毒干扰Wnt5a处理TC-1细胞系及其阴性对照细胞系后BCG感染24h.设置4个实验组:NC组、NC+BCG 组、Si-3 组和 Si-3+BCG 组.通过 Western blot 检测 Toll 样信号通路 TLR2、TLR4、Myd88、p-NF-κB 和 NF-κB炎症相关蛋白表达水平,免疫荧光法检测各实验组p-NF-κB表达情况,qRT-PCR检测Toll样信号通路TLR2、TLR4、Myd88、p-NF-KB和NF-κB等基因mRNA表达水平,ELISA检测细胞培养上清促炎因子TNF-α、IL-6和IL-10含量.结果 与对照组比较,BCG组炎性相关因子TLR2、TLR4、Myd88、NF-KB、p-NF-κB的蛋白表达水平(均P＜0.01)和mRNA表达水平均显著上调(均P＜0.05),p-NF-κB蛋白荧光强度较对照组显著增加,促炎因子TNF-α和IL-6表达水平升高(均P＜0.01),抑炎因子IL-10表达水平降低.与BCG组相比,Si-3+BCG组上述蛋白表达水平(均P＜0.05)和mRNA表达水平均(均P＜0.01)显著下调,p-NF-κB蛋白荧光强度较BCG组均显著下调,促炎因子TNF-α和IL-6(均P＜0.05)表达水平显著降低,抑炎因子IL-10表达水平显著升高(P＜0.01).结论 干扰Wnt5a可调控卡介苗(BCG)感染的小鼠肺上皮细胞(TC-1)的炎性反应,其调控作用机制是通过Toll样信号通路依赖Myd88途径抑制BCG诱导的TC-1炎性反应.
