Гибридные Флуоресцентные Белки На Основе 10-Го Домена Фибронектина Человека

Л. Е. Петровская,С. Ш. Гапизов,Л. Н. Шингарова,Е. А. Крюкова,Е. Ф. Болдырева,С. А. Якимов,Е. В. Свирщевская,Е. П. Лукашев,Д. А. Долгих,М. П. Кирпичников

Bioorganicheskaia khimiia（2014）

被引用0|浏览13

摘要

В работе представлен новый тип гибридных молекул, включающих красный флуоресцентный белок mCherry и 10-й домен фибронектина человека типа III (10Fn3) один из альтернативных каркасных белков, на основе которого могут быть получены рекомбинантные аналоги антител различной специфичности. Сконструированы различные варианты гена, кодирующего гибридный флуоресцентный белок, и изучена их экспрессия в клетках Escherichia coli. Установлено, что расположение mCherry на N-конце гибридного белка и предложенная нами модификация его N-концевой аминокислотной последовательности способствуют увеличению выхода продукта экспрессии в растворимой форме. На основе предложенной конструкции получен гибридный флуоресцентный белок ChIBF, содержащий -интегринсвязывающий вариант 10Fn3, и продемонстрирована возможность его использования для визуализации -интегрина на поверхности эпителиальных клеток MDCK методом конфокальной микроскопии.

查看译文