金嗓清音丸中僵蚕成分的特异性引物扩增鉴定

目的 建立特异性引物扩增鉴定金嗓清音丸中僵蚕成分.方法 根据家蚕、白僵菌、绿僵菌线粒体全基因序列差异设计特异性引物PM2、PB2、PA2,采用十六烷基三甲基溴化铵法、酚仿抽提法提取纯化总DNA,并以此为模板进行特异性引物扩增和方法学考察,产物以2％琼脂糖凝胶电泳检测.结果 家蚕、白僵菌、绿僵菌DNA经PCR扩增后,分别在82、94、144 bp处产生条带,并且未观察到非特异性扩增条带.PM2、PB2、PA2对相应DNA的检测灵敏度分别为0.10、0.10、0.010 ng/μL.来自同一厂家的6批样品中同时检出家蚕、白僵菌DNA,但未检出绿僵菌DNA,而另外2批样品仅检出家蚕DNA.结论 该方法方便可靠,专属性强,有助于更好地监控金嗓清音丸等含僵蚕中药成方制剂的质量,可为其临床用药的安全性和有效性提供保障,并为其他中成药中动物药的专属性鉴定提供参考.