Os marcadores moleculares tem sido utilizados em diversas etapas dos programas de melhoramento genetico. Uma nova aplicacao de marcadores microssatelites, visando a purificacao de populacoes segregantes, esta descrita neste trabalho. Uma populacao supostamente F2 de algodoeiro, constituida de 196 plantas foi avaliada com marcadores microssatelites, e um grande numero de plantas homozigotas com genotipo materno em todos os locos analisados foi identificado. Uma analise com base nas proporcoes esperadas dos genotipos de marcadores foi realizada, e 108 plantas que foram homozigotas para o genotipo materno em todos os locos avaliados foram eliminadas da populacao. As plantas foram eliminadas com uma probabilidade minima de 99,98% de terem sido obtidas por autofecundacao, e somente cinco plantas, das 108, apresentaram probabilidade inferior a 100%. A populacao F2 estava sendo avaliada quanto a resistencia a Doenca Azul do algodoeiro, e sem a purificacao, a hipotese de segregacao de dois genes teria sido aceita. Apos a purificacao, a hipotese de heranca de um gene dominante foi aceita. Os resultados demonstram a importância da certificacao da pureza das populacoes segregantes em estudos geneticos. (Resume d'auteur)