目的 通过与常用的结核病病原学实验室诊断技术进行比较,评价液-固相培养技术在结核分枝杆菌培养中的应用价值,为临床诊断提供参考依据.方法 选取无锡市第五人民医院2020年7—12月收治的肺结核患者176例.用浓缩集菌抗酸涂片、MGIT 960全自动液体培养和液-固相培养分别对入组患者痰液样本进行检测,并统计分析阳性率、阳性时间差异.结果 液-固相培养的阳性率为58.0％,相对MGIT 960液体培养(56.3％),差异无统计学意义.液-固相培养和MGIT 960液体培养平均阳性时间分别为8.0(6.0,10.0)d和10.0(7.0,15.0)d,差异有统计学意义(Z=-3.223,P<0.001).按MGIT 960液体培养阳性时间,分为1～10 d、11～20 d、21～35 d 3个组别,在11～20 d组内,液-固相培养阳性时间10.0(7.3,13.5)d相较于MGIT 960液体培养14.0(12.0,16.0)d,差异有统计学意义(Z=-4.582,P<0.0001);在21～35 d组内,液-固相培养相较于MGIT 960液体培养差异有统计学意义(Z=-2.805,P=0.005).此外,液-固相培养技术还可以初步鉴别非结核分枝杆菌,5例非结核分枝杆菌经基因芯片确认为胞内分枝杆菌3例和鸟分枝杆菌2例.结论 液-固相培养检测结核分枝杆菌阳性率高,且培养时间短,可作为结核分枝杆菌培养的优选方法.

目的 在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值.方法 以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基因完整序列,克隆至分枝杆菌表达载体pMF406,构建重组质粒pMF406-rv3873,电转化至Msm mc2155,加入乙酰胺诱导表达Rv3873同源重组蛋白(mRv3873),利用亲和层析进行纯化,Western blot分析抗原特异性;ELISA法检测27份TB患者和31份健康者血清IgG抗体,以大肠埃希菌表达的Rv3873(rRv3873)和免疫优势抗原Ag85A作为对照抗原,评价mRv3873在TB血清学诊断中的作用.结果 在Msm中成功表达了重组Mtb蛋白mRv3873,主要以可溶形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化可获得高纯度(95％)的可溶性重组蛋白,蛋白浓度约为2.0 mg/mL;TB患者组血清中抗mRv3873和Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康组(P＜0.05),而两组血清rRv3873特异性IgG水平差异无统计学意义(P＞0.05);mRv3873抗原与对照抗原Ag85A的诊断效能相当,ROC曲线下面积分别为0.776 0和0.778 4,显著高于异源表达抗原rRv3873的曲线下面积(0.586 6).结论 在快速生长分枝杆菌Msm中可高水平表达并纯化MtbRD1区抗原Rv3873,较之异源表达抗原,TB患者产生针对mRv3873的IgG水平显著高于健康人群,分枝杆菌同源表达的mRv3873具有作为TB血清诊断的潜力.

目的 原核表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)早期分泌蛋白MPT64,并初步评估其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值.方法 PCR扩增Mtb标准菌株H37Rv mpt64基因,克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pET28a-mpt64,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,进行重组蛋白的原核诱导表达及纯化.将600 μg纯化的MPT64蛋白经皮下多点免疫新西兰大白兔,隔周免疫1次,共4次,末次免疫2周后,耳缘静脉采血分离血清,ELISA法检测血清效价,Western blot法鉴定抗原特异性.收集44例TB确诊患者(TB组)和36名健康对照人群[HC(heahhy control)组]血清,间接ELISA法检测血清中MPT64抗原的特异性IgG、IgA抗体水平,抗原对照为GroES和Ag85A.结果 重组表达质粒pET28a-mpt64经双酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组MPT64蛋白主要以包涵体形式存在,部分以可溶性形式存在,经Ni2+-NTA亲和纯化后,纯度可达90％,蛋白浓度约2.0 mg/mL;MPT64兔多克隆抗血清效价达1:2048000,纯化的MPT64蛋白可与其发生反应,在相对分子质量约24000处可见特异性蛋白条带;TB组血清中MPT64抗原特异性IgG和IgA水平均显著高于HC组(P＜0.05),而GroES、Ag85A抗原特异性IgA和IgG水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组MPT64蛋白具有较好的血清学诊断效能,可作为TB血清学早期诊断的候选抗原之一.

This study aimed to investigate the transport characteristics of aripiprazole. A human intestinal epithelial cell model Caco-2 cell in vitro cultured had been applied to study the transport of aripiprazole. The effects of time, concentration of donor solutions, pH, temperature and P-glycoprotein inhibitor on the transport of aripiprazole were investigated. The determination of aripiprazole was performed by HPLC. It is concluded that aripiprazole is transported through the intestinal mucosa via a passive diffusion mechanism primarily, coexisting with a carrier-mediated transport. The transport of aripiprazole is positively correlated to transport time, pH, and temperature. Papp increased with donor concentrations up to 10 microg x mL(-1), and then decreased for higher concentrations. The P-glycoprotein inhibitor cyclosporine A significantly enhanced the transport amount of aripiprazole.