目的:探讨环加氧酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合5-脂加氧酶(5-LO)抑制剂齐留通对ApoE-/-小、鼠动脉粥样硬化(AS)病变的影响及机制.方法:雄性ApoE-/-小鼠随机分成AS模型组、塞来昔布组(80 mg/kg/d)及塞来昔布联合齐留通(400 mg/kg/d)组(高脂饲料喂养),野生型雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组(普通饲料喂养),每组12只.每日灌胃给药18周后,取血测定血脂水平,小动物B超下测量主动脉弓斑块面积比(％)、主动脉全长油红O染色测量阳性斑块面积比(％)及主动脉根部切片苏木精—伊红(HE)染色测量斑块面积比(％)和内中膜厚度(IMT)并观察AS病理形态学改变,ELISA测定主动脉匀浆花生四烯酸(AA)代谢产物前列腺素E2(PGE2)和白三烯(LTs)[包括白三烯B4(LTB4)和半胱氨酰白三烯(CysLTs)]含量.结果:与正常对照组比较,AS模型组小鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01),但总甘油三酯(TG)水平无明显改变(P＞0.05);塞来昔布组及塞来昔布联合齐留通组血脂各指标与AS模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).小动物B超、主动脉全长油红O染色及主动脉根部切片HE染色病理学观察及定量检测结果均表明AS模型组小鼠形成了明显的主动脉AS病变,塞来昔布加重AS病变,塞来昔布联合齐留通减轻塞来昔布加重的AS病变(均P＜0.05或P＜0.0l).AS模型组小鼠主动脉匀浆PGE2、LTB4和CysLTs含量均较正常对照组显著升高(P＜0.01);与AS模型组相比,塞来昔布组小鼠主动脉匀浆PGE2含量显著降低,而LTB4和CysLTs含量则显著升高(P＜0.01);与塞来昔布组相比,塞来昔布联合齐留通组主动脉匀浆PGE2含量无明显改变(P＞0.05),但LTB4和CysLTs含量明显降低(P＜0.01).结论:塞来昔布上调LTs加重ApoE-/-小鼠AS病变的作用可被5-LO抑制剂齐留通逆转.

目的:探讨复方山慈菇醇提物对人三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响.方法:将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为溶剂对照组和复方山慈菇醇提物组,0.1％ DMSO或不同浓度的复方山慈菇醇提物作用于MDA-MB-231细胞24 h、48 h后,CCK-8法检测细胞活性;Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化;Annexin V-APC/7-AAD双染色流式分析检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达.结果:复方山慈菇醇提物可浓度和时间依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.05),24 h、48 h的IC50分别为0.51 mg生药/mL和0.26 mg生药/mL;0.25 mg生药/mL、0.5mg生药/mL、1.0mg生药/mL复方山慈菇醇提物处理24 h后,Hoechst33342染色显示细胞出现凋亡样变化;流式细胞术检测结果表明,与溶剂对照组比较,复方山慈菇醇提物可浓度依赖性地增加MDA-MB-231细胞凋亡率(P＜0.05);Western blot法显示,与溶剂对照相比,0.5mg生药/mL复方山慈菇醇提物组Bax、Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(均P＜0.05).结论:复方山慈菇可体外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,机制可能与其下调Bcl-2及上调Bax、Caspase-3蛋白表达而诱导凋亡有关.

目的 探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和自噬的影响.方法 不同浓度AA作用于人肝癌SMMC-7721细胞24h后,MTT法检测细胞活性并观察自噬抑制剂3-MA对40 μmol/L AA的干预作用;MDC染色检测自噬泡的形成,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、mTOR、p-mTOR及p53的表达.结果 MTT检测结果显示,不同AA浓度均可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并呈浓度依赖性(F=46.790,P=0.006),IC50=37.313 μmol/L.与单独使用40 μmol/L AA相比,自噬抑制剂3-MA可部分逆转40 μmol/L AA对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用[(46.400±9.099)％ vs (22.000±3.391)％,P＜0.001].MDC染色实验表明40 μmol/L AA干预可增加自噬泡形成.Westernblot检测发现,与对照组比较,40 μmol/L AA可明显降低LC3-Ⅰ的蛋白表达,而提高LC3-Ⅱ表达(1.744±0.108 vs 1.529±0.065,t=2.928,P=0.043;0.113±0.031 vs 0.380±0.036,t=-9.754,P＜0.001),降低p62蛋白表达(0.522±0.024 vs 0.123±0.019,t=22.565,P＜0.001)和p-mTOR蛋白表达(1.252±0.039 vs 0.353±0.028,t=30.775,P＜0.001),但对mTOR和p53的蛋白表达无影响(1.713±0.111 vs 1.556±0.076,t=1.555,P=0.190;0.671±0.040 vs 0.726±0.055,t=-1.555,P=0.210).结论 AA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,可能与其通过非p53依赖方式负调控mTOR通路诱发自噬有关.

目的:研究积雪草酸(AA)体内外抗肝癌效应及其凋亡机制.方法:将人肝癌SMMC-7721细胞分为溶剂(0.1％DMSO溶剂)对照组和不同浓度(20 μmol/L、30 μmol/L、40 μmol/L、50 μmol/L、60 μmol/L) AA组,作用于SMMC-7721细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,Annexin V-APC/7-AAD双染色流式分析检测细胞凋亡率,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,同时采用Western blotting检测线粒体凋亡相关蛋白的表达.建立SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组、AA 50 mg/kg组和AA 100 mg/kg组,每组5只,观察AA灌胃给药21d后移植瘤的生长情况.结果:AA浓度依赖性地抑制SMMC-7721细胞增殖(IC50=38.31μmol/L)并促使细胞产生凋亡样改变.与溶剂对照组相比,AA 20 μmol/L组、AA 40μmol/L组、AA 60 μmol/L组均可提高SMMC-7721细胞凋亡率,并降低细胞线粒体膜电位(均P＜0.01),具有一定的浓度依赖性;此外,AA 40 μmol/L组明显上调Bax、Cyt-C和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01),但对p53蛋白表达无明显影响(P＞0.05).AA 50 mg/kg组和AA 100 mg/kg组给药第14、第21天时的肿瘤体积明显小于对照组,给药第21天时的肿瘤质量小于对照组(均P＜0.01).结论:AA具有体内外抗肝癌作用,其机制可能与其诱导非p53依赖的线粒体途径的凋亡有关.

近二十年来通过对树突状细胞(dendritic cells,DC)的研究,学者们一致认为DC是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),其具有树枝状形态,膜表面高表达MHCⅠ和Ⅱ类分子以及多种辅助分子(如 CD54、CD80、CD86等),能有效摄取、加工和处理抗原并激活初始型T细胞.