诊断黑热病的传统方法,是以骨髓穿刺物涂片镜检或培养,但骨髓穿刺不仅给患者造成痛苦,而且易漏诊.70年代以来,黑热病的血清学检查在国内外发展很快,如IFA[1]、IHA[2]、ELISA[3]和McAb-AST[4]等方法.Burns等[5]获得了利什曼原虫类Kinesin基因中编码39个氨基酸重组片段的表达产物rK39,用于美洲内脏利什曼病的诊断,阳性率100%.Dipstick是近年发展起来的一种快速诊断方法,它将免疫分子亲和原理和免疫印迹法、经典的薄层层析技术相结合.由于其敏感性高、操作简便和报告结果快速而被广泛应用于疾病的诊断,如疟疾[6]和钩端螺旋体病[7]的诊断.在本文中,以rK39制备的Dipstick试条上的两个区带分别结合有用于检测特异抗体的重组抗原rK39和作为试验条件控制的人IgG,用胶体金作展开剂.我们将此试条用于黑热病的检测.

[目的]分析新疆皮肤利什曼病病原体SSU rRNA基因序列,为该病原体种株鉴定分析提供实验依据.[方法]应用利什曼原虫特异引物R222及R333,PCR扩增SSU rRNA基因多变区的片段,克隆于T-Easy vector,并以双脱氧链末端终止法进行序列测定,用DNASIS软件和GenBank微机联网检索分析所测XJCLP、L.infantum及L.tropica SSU rRNA基因序列.[结果]XJCLP、L.infantum及L.tropica SSU rRNA基因插入片段长度均为394bp.XJCLP与L.tropica SSU rRNA基因394 bp序列存在3个点突变,两者有391个碱基相同,相似性为99.2%.XJCLP与L.infantum SSU rRNA基因序列存在3个点突变及1个移码突变,两者有390个碱基相同,类似性为99.0%.L.infantum与L.tropica的SSU rRNA基因序列存在1个移码突变,相似性为99.7%.XJCLP、L.infantum及L.tropica SSU rRNA基因序列一级结构与RNA二级结构均不同.经用GenBank检索本次所测XJCLP、L.infantum及L.tropica SSU rRNA基因序列,该GenBank内尚无同类394 bp的SSU rRNA基因序列.[结论]XJCLP、L.infantum及L.tropica的SSU rRNA基因394 bp序列一级结构,二级结构存在差异.

DNA fragment from Leishmania donovani(L.d) cDNA was cloned in pUC18 plasmid vector. Two expression clones was screened from L.d cDNA. The L.d antigen gene clone encoded a 23 kDa molecule (L.d p23), The L.d 23 kDa could be reacted with rabbit antiL.d serum and human antiL.d serum by western blot.

OBJECTIVE:To analyze the sequence difference of the SSU rDNA variable regions of Leishmania isolates from hilly foci and plain foci of China.METHODS:Specific SSU rDNA fragments from nuclear DNA of five Leishmania species and isolates were amplified by PCR. The amplified DNA fragments were cloned into pGEMR-T Easy vector. The specific fragments were sequenced by the automated DNA sequencer.RESULTS:Sequence analysis showed that the amplified DNA fragments of five Leishmania species and isolates were all 392 bp in length, point mutations were located in the two unique sequence (UQ-I and UQ-II); L. d. SC10 and L. d. GS7 had two same point mutations in UQ-II, only L. d. GS7 had one in UQ-I; no insertion/deletion.CONCLUSION:Sequence difference of the SSU rDNA variable region existed between Leishmania isolates from hilly foci and plain foci; The sequences of the SSU rDNA variable regions of L. d. SD2 isolate and L. infantum were identical.

核酸疫苗 (Nucleic Acid Vaccines) 包括DNA疫苗和 RNA疫苗，但目前研究最多的是DNA疫苗(DNA vaccine)。DNA疫苗是指将编码某种抗原蛋白的外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内，从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答。核酸疫苗又称为基因疫苗或裸DNA疫苗，这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫及遗传免疫等。 1 核酸疫苗的作用机理 核酸疫苗的免疫学机理尚不完全清楚，目前初步研究认为编码目的基因的质粒DNA被抗原提呈细胞(APC)摄入后，可在APC内表达抗原物质。该内源性抗原在被分解成抗原短肽后进入内质网，与I类MHC(组织相容性复合物)分子结合后被传送到细胞表面，提呈给CD8+的细胞毒T淋巴细胞(CTL)，激活细胞免疫反应；并且分泌型的抗原或者是抗原在细胞死亡后释放到细胞间质，被专一的抗原提呈细胞(pAPC)内吞，与MHCⅡ型分子形成一个成熟的MHCⅡ型抗原复合物，被CD4+T淋巴细胞识别并使其激活，激活的CD4+T淋巴细胞可以辅助激活B淋巴细胞，使其产生大量的专一性抗体或者激活T杀伤细胞或者通过分泌有关的细胞因子使机体产生免疫反应[1]。

用单克隆抗体一抗原斑点试验（McAb—AST）对我国山丘疫区27例（32人次）黑热病患者在斯锑黑克治疗前、后检测循环抗原作了对比观察,以考核疗效。其中25例治前骨髓涂片查见病原体,2例骨髓片漏诊。32人次治疗前MeAb—AST均显阳性反应。一个疗程后McAb—AST转为阴性的16人次,临床表现为痊愈,McAb—AST仍为阳性反应的9例,临床表现也未愈;余7人次McAb—AST与临床症状均有一定程度好转。本法显示的结果与患者病情的归转状况及病原体的查获与否是相吻合的。表明McAb—AST可用于黑热病治后近期疗效考核,且可弥补骨髓涂片的漏诊。