[目的]研究miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响及其在不同组织中的表达情况,为探究miRNA在肌肉发育中的调控机制提供理论基础.[方法]利用生物信息学方法预测miR-495-3p的靶基因;实时荧光定量PCR检测miR-495-3p及其靶基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌等组织中的表达水平.构建 miR-495-3p 的过表达(miR-495-3p mimic、miR-495-3p mimic NC)及抑制物(miR-495-3p inhibitor、miR-495-3p inhibitor NC),在山羊骨骼肌细胞汇合度达60％～70％时进行转染,并用含2％马血清的培养基进行诱导分化,用CCK-8检测细胞增殖活力,实时荧光定量PCR检测过表达和干扰效率及增殖分化相关基因配对盒基因(paired-box 7,Pax7)、细胞蛋白周期 E(Cyclin E)、肌细胞生成素(myogenin,myoG)、生肌因子5(recombinant myogenic factor 5,Myf5)的表达;构建miR-495-3p靶基因的野生型和突变型载体并转染至293T细胞,用双荧光素酶测定miR-495-3p与其靶基因的结合情况.[结果]生物信息学预测结果表明,miR-495-3p的靶基因为心肌肌动蛋白α1(alpha cardiacactin 1,ACTC1),且miR-495-3p和ACTC1在1和10月龄山羊背最长肌中表达量均差异极显著(P＜0.01).miR-495-3p和ACTC1在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌6种组织中均有表达,在背最长肌中表达量较高.细胞转染结果表明,miR-495-3p mimic极显著促进miR-495-3p的表达(P＜0.01),miR-495-3p inhibitor 极显著抑制 miR-495-3p 的表达(P＜0.01),说明 miR-495-3p mimic 和 miR-495-3p inhibitor 可用于后续试验.实时荧光定量PCR结果表明,过表达miR-495-3p促进骨骼肌细胞分化相关标志基因MyoG、Myf5的表达,抑制miR-495-3p则降低MyoG、Myf5基因的表达;过表达、干扰miR-495-3p对Pax7、Cyclin E基因的表达及细胞增殖活力均无显著影响(P＞0.05).双荧光素酶报告结果表明,miR-495-3p与ACTC1基因存在靶向关系.[结论]miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞的增殖无显著影响,但可通过靶向ACTC1基因促进山羊骨骼肌细胞分化.

[目的]检测隆林猪的全基因组拷贝数变异.[方法]采集33头隆林猪的耳组织样本,通过酚-氯仿法提取DNA后,使用猪中芯一号50K SNP芯片进行基因分型,得到的原始数据通过Genomestudio软件和Linux系统进行处理,使用CNVPartition和PennCNV软件分别检测拷贝数变异(copy number variation,CNV),并利用Bedtools软件将CNV合并为拷贝数变异区域(copy number variation region,CNVR),使用Biomart对CNVR进行基因定位,利用David网站对定位到的基因进行GO和KEGG富集分析,使用猪QTL数据库对共同CNVR进行QTL注释.[结果]CNVPartition软件共检测到260个CNVs,合并为47个CNVRs,其中缺失型40个、获得型5个、混合型2个,共定位到84个基因,显著富集到13条信号通路;PennCNV软件共检测到96个CNVs,合并为15个CNVRs,其中缺失型9个、获得型1个、混合型5个,共定位到8个基因,显著富集到8条信号通路;2个软件检测结果定位到的基因主要富集在嗅觉相关通路和G-蛋白偶联相关通路中,其中INPP5B、NEURL1和GAPDHS基因显著富集到精子活力通路;2个软件获得了 3个共同CNVRs,其中缺失型、获得型和混合型均为1个,共定位到8个基因,显著富集到涉及嗅觉感官知觉的化学刺激检测通路、嗅觉受体活性通路、嗅觉转导通路、G-蛋白偶联受体活性通路、G-蛋白偶联受体信号通路、膜整体组件通路和质膜通路共7条信号通路;共有130个QTLs与3个共同CNVRs重叠,其中与背膘厚、肉质和乳头数相关的QTLs分别有11、9和6个.[结论]隆林猪CNV可能与嗅觉功能、繁殖性能、背膘厚、肉质和乳头数性状相关.

[目的]通过对1和60日龄广西麻鸡腿肌进行转录组测序(RNA-Seq),筛选出广西麻鸡生长发育关键基因.[方法]选择1和60日龄健康母鸡各3只,分别采集腿肌组织,利用Illumina NovaseqTM 6000平台进行mRNA转录组测序,利用DESeq2软件进行差异表达基因的分析,并对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,进一步筛选出生长发育相关基因,并用实时荧光定量PCR验证转录组测序结果.[结果]转录组测序结果显示,6个样本分别获得34 296 198～41 647 642条clean reads.与1日龄腿肌相比,60日龄腿肌共获得2 304个差异表达基因,其中998个基因上调,1 306个基因下调.GO功能富集分析发现,共获得富集条目572条,其中生物过程381条,细胞组分70条,分子功能121条.KEGG通路富集分析发现,共获得34个显著富集的信号通路,其中心肌收缩、MAPK信号通路、紧密连接、肌动蛋白细胞骨架信号通路、心肌细胞中的肾上腺素能信号传导等与生长发育相关.通过GO功能和KEGG通路富集分析获得5个生长发育相关基因,分别为肌球蛋白重链10(MYH10)、肌球蛋白链15(MYH15)、成纤维细胞生长因子10(FGF10)、成纤维细胞生长因子16(FGF16)、肌肉生长抑制素(GDF8)基因,其中MYH10、MYH15、FGF10为上调差异表达基因,FGF16和GDF8为下调差异表达基因.所选差异表达基因实时荧光定量PCR结果与转录组测序的基因表达水平一致,说明转录组测序结果可靠.[结论]本试验通过对广西麻鸡1和60日龄2个不同生长阶段进行转录组测序分析,获得MYH10、MYH15、FGF10、FGF16、GDF8共5个与生长发育相关的关键基因,为后续进一步探讨广西麻鸡生长发育的分子调控机制提供参考.

为了探究小肌肉蛋白(Small Muscle Protein X-link,SMPX)在隆林山羊中的蛋白结构和组织表达水平,本研究克隆隆林山羊SMPX,并进行生物信息和组织表达谱分析.从NCBI查找山羊SMPX基因序列设计引物,根据TRlzol法提取1月龄隆林山羊心、肝、脾、肺、肾、背肌的总RNA,反转录成cDNA,并克隆SMPX,通过qRT-PCR分析SMPX在不同组织中的表达水平,进行生物信息学分析.SMPX基因编码区序列全长253 bp,共编码255个氨基酸,与NCBI上山羊编码区序列同源性达100％.SMPX蛋白的分子质量20.61 ku,等电点为5.29,是酸性蛋白,其在1～22个氨基酸处具有信号肽.SMPX有11个磷酸化位点,在隆林山羊不同组织中的表达量不一样,推测它可能在不同组织中发挥不同的生物学作用.

为寻找影响广西麻鸡不同生长时期,胸肌和腿肌组织间的差异基因和相关信号通路,以120日龄的广西雌性麻鸡胸肌和腿肌为研究对象,利用RNA-Seq技术对广西麻鸡不同生长时期胸肌和腿肌组织中差异表达基因进行筛选.转录组测序使用illumina NovaseqTM 6000测序,生物学重复3次,以P<0.05为标准筛选差异表达基因,结果发现,肌肉组织中有1953个差异基因,其中上调基因1415个,下调基因538个.通过对KEGG(P<0.05)通路分析发现,MAPK信号通路、粘着斑、PPAR信号通路和心肌细胞的肾上腺素能信号参与整个发育阶段;GO功能富集分析发现,在生物过程(BP),FHL、RBP7、MYBPC1、MUSTN1、TGF-β3、MY01C、IGF2和ADAM12对广西麻鸡的生长调控影响较大.

旨在对几个中国地方猪品种进行群体遗传结构分析,并筛选与中国地方猪产仔数相关的基因组选择信号及候选基因.本研究下载了6个中国地方品种猪共计102头个体的Illumina PorcineSNP60芯片数据,构建了包括19头迪庆藏猪、16头明光小耳猪、16头五指山猪在内的低产仔数组和包括11头姜曲海猪、20头蓝塘猪、20头梅山猪在内的高产仔数组,经质控和基因型填充后,使用软件进行亲缘关系分析、主成分分析、连锁不平衡衰减分析、群体遗传结构分析、进化树构建和选择信号分析,并对受选择位点进行基因定位和功能富集分析.对数据进行质控和基因型填充后共获得33285个SNPs位点,6个中国地方猪品种间个体的亲缘关系较远,品种内个体亲缘关系较近;6个群体的LD衰减速度都非常快,依次为梅山猪＜蓝塘猪＜姜曲海猪＜明光小耳猪＜五指山猪或迪庆藏猪;梅山猪群体内存在3个亲缘关系较高的小群体,明光小耳猪有部分个体与迪庆藏猪聚集在一起,各个猪种在进化树的距离与其地理距离较为一致.选择信号分析共筛选到176个受选择的SNPs位点,在其上、下游12.68 kb范围内共检测到66个候选基因,富集到6条信号通路.通过文献查阅发现5个可能与繁殖性状相关的基因,其中CHD7与生长发育迟缓和生殖器异常相关,FBXO43与繁殖力相关并且影响呈圆周运动的精子数量,RUNX1控制雌激素、雄激素和前列腺素的分泌,STRBP与卵巢发育有关,TEDDM1在附睾中特异性表达.CHD7、FBXO43、RUNX1、STRBP和TEDDM1基因可能作为中国地方猪产仔数性状的候选基因.

雌性动物卵泡发育是一个动态的、受众多激素及调控因子直接或间接参与的复杂生物学过程,其中卵巢颗粒细胞的增值和分化能调节卵泡的生长和成熟,颗粒细胞的凋亡,影响卵泡闭锁.环氧合酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)在卵巢中主要在颗粒细胞中表达,可通过对下游代谢产物的调节,以不同的方式抑制颗粒细胞凋亡,参与PI3 K/AKT/NOTCH/Wnt信号通路的调节,从而作为排卵诱导因子诱导排卵.

目的 探讨发酵桑树全部或部分代替豆粕日粮对陆川肉猪血液生化指标及屠宰性能影响效果.方法 试验选取36头陆川育肥肉猪随机分为3组,每组12头,分别饲喂发酵桑树代替全部豆粕(试验A组)或50％豆粕(试验B组)与对照组(全价日粮),对各组猪生化指标和屠宰性能进行测定,试验期90 d.结果 饲喂添加不同水平发酵桑树日粮的试验日粮与对照组比较,试验A组血液中葡萄糖、胴体膘厚和脂率含量与试验B组、对照组比较显著降低,而猪瘦肉率显著提高.结论 陆川育肥猪饲喂发酵桑树代替全部豆粕日粮,可提高猪胴体瘦肉率.