目的 建立一种快速、灵敏、特异、高效的食源性大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法.方法 针对大肠埃希氏菌O157:H7型的O抗原特异基因rfbE保守区域设计特异性引物和探针,合成基因片段绘制标准曲线,在菌液基因组DNA和质粒双层面调试优化以完成方法的初步建立.其后,对该方法的特异性、敏感性、重复性等进行全面的质量评估验证.结果 该方法特异性100％;基因组DNA检测敏感性为7.11×102 fg/μL;纯培养物水平检测敏感性为1.0×102 CFU/mL;重复性变异系数在0.10％～1.00％之间;标准曲线相关系数r2为0.9994.结论 成功建立了一种性能良好的大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光探针PCR快速检测方法,该方法具有灵敏度高、特异性强、扩增时间短,仅为35 min的特点,可用于疑似大肠埃希氏菌O157:H7型污染样品的快速诊断检测.

对呕吐毒素荧光免疫层析检测卡在谷物产品快速检测中的应用进行了评价,确定呕吐毒素荧光免疫层析检测卡的检出限和定量限,同时对检测卡的重复性、准确度、特异性和大型仪器确证方法检测结果的一致性进行了试验.结果显示,检测卡检测面粉、玉米面、大米基质中呕吐毒素的检出限分别为18.89、19.65、21.39 μg/kg,定量限分别为20.09、20.77、24.12 μg/kg;批内回收率为89.65％～105.94％,批内变异系数为1.07％～9.96％,批间回收率为90.67％～101.64％,批间变异系数为4.94％～9.45％,与玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素、T-2毒素交叉反应率分别为0.26％、0.15％、0.05％、0.01％、0.09％;与免疫亲和层析净化高效液相色谱法(GB 5009.111-2016《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》第二法)相比,两种方法检测结果相对误差≤ 16.28％.结果表明,呕吐毒素荧光免疫层析检测卡具有检测快速、灵敏度高、准确性高等特点,且操作简单、省时省力、经济便携,能满足市场快速检测的需求,为谷物产品的安全监测提供保障和便利,具有广阔的应用前景.

目的:建立超高效液相色谱串联质谱法同时测定水产品中孔雀石绿和地西泮含量的方法.方法:样品经 1％甲酸乙腈提取,正离子扫描,内标法或外标法定量.结果:孔雀石绿、地西泮在 0.5～20.0 ng·mL-1线性关系好,回收率在82.1％～96.1％,精密度在2.9％～7.8％,检测低限为0.5 ng·mL-1.结论:本方法准确度高、灵敏度高、稳定性好,可以同时有效地测定水产品中孔雀石绿和地西泮的含量.

为建立一种鸭坦布苏病毒荧光RT-PCR核酸检测方法,特针对鸭坦布苏病毒E基因的保守片段设计特异性引物和探针,在鸭坦布苏病毒核酸层面和合成基因质粒层面,经一系列优化调试完成方法初步建立.其后,对该方法的特异性、敏感性、重复性、标准曲线、扩增效率等方面进行了验证.结果显示:该方法特异性100％;敏感性为10copies/μL;重复性CV值在0.07％～0.65％区间;标准曲线相关系数为0.9995,扩增效率为99.0％.综上所述,本试验成功建立了一种性能良好的鸭坦布苏病毒荧光探针RT-PCR核酸检测方法,可为DMTUV的临床诊断和流行性病学调查提供一种技术支撑.

由于抗生素的大量使用尤其是广谱抗菌喹诺酮类药物的广泛应用在鸡的养殖上,造成了喹诺酮类药物在鸡肉产品和鸡蛋中的残留.胶体金免疫层析技术以快速、简便、灵敏、易保存、稳定性好等特点,弥补了传统方法的不足,适应于流通中的快速现场筛查.本文主要介绍了胶体金免疫层析技术在鸡蛋中喹诺酮类药物残留的现场快速筛查方法的应用及发展前景.

目的 研究真菌毒素胶体金检测试剂条的质量.方法 应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测饲料谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)检测试剂条.为使该检测试剂条质量性能指标满足GB 2761-2011《食品中真菌毒素限量》及《饲料卫生标准》要求,通过灵敏度、特异性、实验室高效液相色谱法(HPLC)一致性分析,评价真菌毒素胶体金检测试剂条的质量性能.结果 研制的检测试剂条灵敏度99％、特异性97％、假阴性率1％、假阳性率3％、与实验室HPLC法显著性差异分析χ2<3.84,灵敏度高,特异性好.结论 研究中的真菌素胶体金检测试剂条能满足食品安全相关国标要求,可用于谷物、饲料中真菌毒素的现场检测.

目的 研究不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原性蛋白对PRRSV抗体ELISA检测效果的影响.方法 将PRRSV重组N蛋白、M蛋白和GP5蛋白3种蛋白抗原单独包被,灵敏度分别为85.0％、60.0％、50.0％.为进一步优化ELISA检测方法,以N蛋白为主包被蛋白,M蛋白和GP5蛋白以不同的比例混合包被,研究最佳包被条件.结果 当N蛋白、M蛋白和GP5蛋白以5ng:5ng:5ng/孔包被时,敏感性和特异性均达到100％,混包效果优于抗原性蛋白单独包被.为今后PRRSV抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础.