目的:探讨敲低代谢型谷氨酸受体5(metabotropic gultamate receptor 5,mGluR5)对6月龄5xFAD小鼠β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)病变、突触结构和神经炎症的影响及其潜在机制.方法:选取2、6和12月龄的野生型(wild-type,WT)和5xFAD小鼠,用Western blot检测不同阶段小鼠海马组织中mGluR5蛋白的表达情况.取6月龄的WT、5xFAD、mGluR5+/-和5xFAD/mGluR5+/-小鼠脑组织,免疫荧光染色检测Aβ斑块的聚集,Western blot检测海马组织中淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)和p-APP蛋白水平,海马组织透射电子显微镜观察突触的超微结构,Western blot检测海马组织中突触蛋白、炎症因子和mGluR5下游磷脂酰肌醇3-激酶(phosphati?dylinositol 3-kinase,PI3K)/AKT信号通路相关蛋白的表达.结果:(1)随着月龄的增加,5xFAD小鼠海马组织中mGluR5的表达显著增加(P<0.01);(2)敲低mGluR5减少了5xFAD小鼠海马区Aβ斑块,降低了APP和p-APP蛋白水平(P<0.05);(3)敲低mGluR5减轻了5xFAD小鼠海马的突触结构损伤,5xFAD/mGluR5+/-小鼠突触前标志物突触小泡蛋白(synaptophysin,SYP)和突触后标志物突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)表达显著高于5xFAD小鼠(P<0.05),而树突标志物微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)和神经元标志物神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)表达无显著差异;(4)敲低mGluR5可降低5xFAD小鼠的神经炎症反应,减少炎症因子的释放;(5)5xFAD小鼠敲低mGluR5可通过激活PI3K/AKT信号通路发挥神经保护作用,还通过抑制糖原合成酶激酶3β(glycogen synthetase kinase-3β,GSK-3β)/κB抑制因子激酶(inhibitor ofκB kinase,IKK)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)炎症信号通路减轻神经炎症反应.结论:敲低mGluR5可以减轻6月龄5xFAD小鼠的Aβ病变、突触结构损伤和神经炎症,其机制可能与PI3K/AKT及其下游GSK-3β/IKK/NF-κB信号通路有关.

目的:分析肾间质纤维化(RIF)早期的蛋白质组表达变化情况,为探讨干预RIF的新靶点奠定基础.方法:(1)48只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照(control)组(6只)、假手术(sham)组(6只)和单侧输尿梗阻(UUO)模型组(36只).UUO组行右侧输尿管结扎,并分别于术后第3、7、11、14、21和28天各处死6只,取肾脏标本行HE染色和Masson染色,光镜下观察病理变化;control组不作任何处理,sham组开腹后只分离右输尿管但不结扎,两组均于第28天取肾脏标本作病理观察;(2)取UUO术后第7天大鼠梗阻侧和健侧肾组织的蛋白质提取液行双向凝胶电泳,两侧对照找出差异蛋白质,选取部分差异蛋白点进行质谱鉴定;(3)Western blot检测UUO大鼠肾脏组织膜联蛋白A5(annexin A5)表达的动态变化.结果:(1)UUO各组梗阻肾脏逐渐出现肾小管扩张、炎症细胞浸润、肾小管上皮细胞萎缩、间质胶原纤维沉积等变化,其中,肾梗阻后第7天开始出现间质纤维化;(2)与健侧肾比较,UUO术后第7天的梗阻侧肾出现≥1.5倍的差异蛋白质166个,其中上调81个,下调85个,质谱成功鉴定出19种差异蛋白质;(3)Western blot显示,各时段UUO组大鼠梗阻侧肾组织中annexin A5表达均明显高于sham组(P<0.05),其中以梗阻第3天组的表达量最高,随后逐渐下降,但仍高于sham组.结论:(1)RIF早期存在大量表达差异的蛋白质;(2)RIF的annexin A5表达显著增加,可能与某些病理变化存在密切关系.

目的:探究随机肌腱细胞外基质(ECM)支架对骨髓间充质干细胞(BMSCs)活力和分化的影响.方法:从Sprague-Dawley大鼠股骨和胫骨中提取BMSCs,体外培养,观察细胞形态,并利用流式细胞术鉴定细胞干性.采用1％Triton X-100和DNase/RNase混合液对鼠尾肌腱进行脱细胞处理,利用HE染色和DNA含量测定考察肌腱组织中细胞核残余情况.制备胶原纤维随机排列的肌腱ECM支架,培养BMSCs,以孔板中生长的细胞为对照组,利用Live/Dead染色和CCK8法考察细胞的活力和形态;利用RT-qPCR检测肌腱标志物I型胶原蛋白(Col I)、肌腱特异转录因子scleraxis(SCX)及成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达水平.结果:HE染色结果显示,经过脱细胞处理后肌腱组织内无细胞残余,且DNA含量从(481.7±15.8)μg/g显著性降至(31.0±3.8)μg/g(P<0.05),脱细胞处理成功.7 d时,种植在支架上的BMSCs的活力较对照组显著增强(P<0.05);14 d时,种植在支架上的BMSCs肌腱标志物Col I和SCX的表达量较对照组显著下调,而成骨标志物ALP和RUNX2的表达量较对照组显著上调(P<0.05).结论:脱细胞随机肌腱ECM支架能增强BMSCs活力,并诱导其向成骨细胞分化.