目的 研究姜叶三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 实验采用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立细胞损伤模型,分为空白对照组、模型组、EOSIR低、中、高剂量组(0.01、0.05、0.10μg/mL)以及阿司匹林组.通过水蒸气蒸馏法提取EOSIR,采用GC-MS联用技术对EOSIR的成分进行分析.采用MTT法确定ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的最佳浓度与时间,分析EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞存活率的影响.Hoechst 33342染色实验观察EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤形态的变化.JC-1染色实验观察EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的线粒体膜电位变化的影响.ELISA法分析EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量影响.流式细胞术检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量以及细胞凋亡的影响.实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的核因子E2相关因子2(nuclear factory erythroid-2 related,Nrf2)、醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、Bcl-2、Bax mRNA表达水平的影响.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响.结果(1)水蒸气蒸馏法提取得到的挥发油出油率为3.78％,GC-MS技术初步分析鉴定了EOSIR中54种化合物,占总挥发油含量的98.86％,其中含量最高的是莰烯,占22.38％;其次是 α-蒎烯,占16.11％;居第三位的是D-樟脑,占9.74％;第四位的是3,3,6,6-四甲基-3,6,7,8-四氢化-并茚-1(2H)-酮,占8.41％.(2)MTT结果显示:与空白对照组相比,EOSIR在0.01～60μg/mL时对正常的HUVECs细胞没有毒性,但大于80μg/mL时有明显的细胞毒性(P<0.01);在200μg/mL的ox-LDL诱导24小时条件下,HUVECs存活率为54.32％(P<0.01),以此作为造模的最佳条件;与模型组比较,EOSIR能显著抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞存活率下降(P<0.01).(3)Hoechst 33342染色结果显示:与空白对照组相比,模型组出现较强的蓝色荧光,给药EOSIR能明显减弱荧光强度并显著改善细胞损伤的形态.(4)JC-1染色结果显示,与空白对照组相比,模型组损伤的细胞表现出绿色荧光强度增强,红色荧光强度下降,给药EOSIR能减弱绿色荧光强度并增强红色荧光强度.(5)ELISA结果显示,与空白对照组相比,模型组的LDH、MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-Px、NO的含量减少(P<0.05,P<0.01).给药EOSIR能降低LDH、MDA含量,升高SOD、CAT、GSH-Px、NO的含量(P<0.05,P<0.01).(6)流式细胞术结果发现,与空白对照组相比,模型组的ROS含量显著升高,凋亡率显著增加(P<0.05).给药EOSIR能显著下调ROS含量并降低细胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01).(7)RT-qPCR分析表明,ox-LDL能诱导激活促凋亡基因Bax mRNA的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,并且降低Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA的表达(P<0.01).EOSIR能显著下调Bax mRNA表达水平,上调Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01).(8)蛋白免疫印迹法结果表明,ox-LDL能诱导激活促凋亡蛋白Bax的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,并且降低Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平(P<0.01).EOSIR能显著下调Bax蛋白表达水平,上调Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01).EOSIR抑制了ox-LDL诱导的HUVEC细胞毒性和凋亡.同时,EOSIR显著抑制了ox-LDL处理的细胞中ROS、LDH和MDA水平的增加,并增加了NO、SOD、CAT和GSH-Px水平.EOSIR上调了Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平.此外,EOSIR能够显著降低了与细胞凋亡相关的生化变化,例如MMP的丢失、Bax mRNA和蛋白质水平的下调以及ox-LDL处理的细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白质水平的上调.结论 EOSIR能够通过调节线粒体依赖性细胞凋亡和激活Nrf2/ARE信号通路来预防ox-LDL诱导的内皮损伤.

目的:探讨lncRNA SNHG11对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能机制.方法:qPCR检测人胚肺细胞HEL-1和NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11和miR-193a-5p的表达水平,向A549细胞中转染SNHG11小干扰RNA(si-SNHG11)、miR-193a模拟物(miR-193a mimic)或miR-193a抑制剂(miR-193a inhibitor)后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室和细胞划痕实验检测对细胞侵袭和迁移的影响,WB法检测对细胞增殖抗原Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的影响,双荧光素酶报告实验验证lncRNA SNHG11与miR-193a-5p的靶向关系.结果:与人胚肺细胞HEL-1相比,NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11均呈高表达、miR-193a-5p呈低表达(均P<0.05);沉默lncRNA SNHG11可抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,降低细胞中Ki67和Cyclin D1蛋白的表达水平(均P<0.05);过表达miR-193a-5p可抑制A549细胞增殖和侵袭迁移(均P<0.05).lncRNA SNHG11可靶向吸附miR-193a-5p,抑制miR-139a-5p可部分逆转沉默lncRNA SNHG11对A549细胞增殖、侵袭和迁移的作用(均P<0.05).结论:lncRNA SNHG11通过吸附miR-193a-5p促进NSCLC A549细胞的增殖、侵袭和迁移.