从绞股蓝转录组挖掘可能与绞股蓝皂苷生物合成相关修饰酶基因细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP)及UDP-糖基转移酶(UDP-dependent glycosyltransferase,UGT)基因的cDNA进行克隆并开展了以下研究.根据课题组前期绞股蓝转录组数据,筛选CYP及UGT Unigenes,利用RT-PCR克隆ORF全长,并结合生物信息学对其编码蛋白进行功能分析,最后通过荧光定量PCR验证其在根、茎、叶的差异性表达.结果 克隆得到两个ORF序列,分别命名为CYP94A1和UGT91A1;CYP94A1序列包含1 509 bp的开放阅读框架,编码一条含503个氨基酸残基的肽链,具有CYP保守结构域;UGT91A1序列包含1 383 bp的开放阅读框架,编码一条含461个氨基酸残基的肽链,具有UGT保守结构域.这两个基因的转录表达均具有组织特异性,在叶或茎中的表达均高于根.CYP94A1和UGT91A1的克隆、转录表达及生物信息学分析为进一步挖掘绞股蓝中CYPs、UGTs及功能验证提供了帮助,增加对CYP和UGT两个超基因家族的认识.

马尔尼菲青霉菌是一种区域性流行于东南亚及中国南部地区的条件致病性温度依赖性双相型病原真菌,它能对免疫功能低下者造成致命的全身性感染,25℃时呈现菌丝状生长,而在37℃或在宿主体内为酵母相生长.为深入研究马尔尼菲青霉菌致病性和双相转化的分子机制,原有的遗传转化筛选标记基因已不能满足研究需要.为此,我们通过用马尔尼菲青霉菌微管蛋白β亚基基因启动子替换粗脉孢菌苯菌灵抗性基因的启动子,构建了一个苯菌灵抗性基因盒,并成功地将其运用于马尔尼菲青霉菌的遗传转化研究中.

TALE核酸酶(TALEN)是一种人工构建的位点特异性核酸内切酶,它能够特异地造成靶序列产生DNA双链断裂(DSB),诱导靶位点产生indel突变,从而实现对基因组的靶向修饰。本实验室曾率先报道应用TALEN技术在斑马鱼中获得可遗传的突变。在此基础上,我们通过大规模定点突变评估了TALEN技术的可靠性,并尝试通过TALEN诱导同源重组与染色体大片段