基于愈创木酚(GA)/过氧化物酶(POD)/过氧化氢(H2O2)反应体系,建立一种新的流动注射分析流路,测定多种植物样品中过氧化物酶活性.结果表明,系统参数优化如下:系统流速1.91 mL/min,样品进样体积40μL,试剂注入体积150μL,反应盘管长度150 cm,磷酸盐缓冲溶液浓度0.05 mol/L,pH 6.0;HCl清洗液进样体积150μL,浓度0.24 mol/L;底物为4.5 mmol/L GA和1.5 mmol/L H2 O2混合溶液;反应产物的表观摩尔吸光系数测定结果为0.0064 L/(μmol·cm).本方法测定范围在153～2752 U/L之间,检出限为25.7 U/L,重现性较好(RSD≤3.38％,n=11),分析速度为90样/h.对五种植物样品中的过氧化物酶活性测定并进行加标回收实验,回收率在95％ ～105％之间.

辣根过氧化物酶(HRP)已被广泛应用于各个领域,但其价格昂贵且不易保存,所以寻找一种可替代HRP的模拟酶意义重大.本研究初步选择血红蛋白(Hb)作为模拟酶,利用流动注射光度系统(SP-FIA),在非平衡状态下对比了Hb与HRP对H2O2/愈创木酚(GA)反应的动态催化性能.结果表明:Hb在弱酸性及高温环境下其稳定性强于HRP;Hb对H2O2/GA反应体系的催化作用符合米氏方程,可作为一种过氧化物模拟酶使用;在动力学研究中发现,Hb对GA和H2O2的催化活性不及HRP,对GA的亲和力强于HRP,对H2O2的亲和力弱于HRP.干扰实验表明,Hb的催化性能可被Co2+、Cu2+、Pb2+、Fe3+、Zn2+激活;EDTA和抗坏血酸可抑制Hb,柠檬酸的酸性环境利于Hb催化;EDTA、抗坏血酸及柠檬酸均能抑制HRP.