目的 探究A20、主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A(MⅠCA)、MⅠCB在脂肪变肝星状细胞(HSC)中的表达及作用.方法 实验组采用0.5 mmol/L混合脂肪酸(FFA)刺激人HSC LX-2细胞24 h,以诱导其发生脂肪变,对照组LX-2细胞不予FFA刺激,两组细胞均予油红O染色.应用实时荧光定量PCR(real-time qPCR)法检测实验组和对照组LX-2细胞内A20、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原、MⅠCA、MⅠCB的mRNA表达水平.结果 实验组油红O染色见细胞质内有明显的红色脂质颗粒沉积.实验组 α-SMA、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平均较对照组明显升高(P=0.035、P=0.041),分别为对照组的1.53倍、2.40倍.实验组A20 mRNA的表达水平较对照组明显升高(P=0.027),为对照组的3.32倍.实验组MⅠCA、MⅠCB mRNA的表达水平均较对照组明显升高(P=0.049、P=0.008),分别为对照组的3.09倍、16.50倍.结论 A20、MⅠCA、MⅠCB在脂肪变HSC中表达升高,可能在肝纤维化的过程中发挥协同作用,具体机制有待进一步阐明.

目的 研究胆管结扎(BDL)所致肝纤维化模型小鼠肝脏中A20 及炎性因子的表达情况,在细胞水平探讨A20的作用机制.方法 建立BDL所致小鼠肝纤维化模型,BDL组结扎胆管后关腹,对照组不结扎胆管直接关腹,10 d后处死小鼠,留取肝脏行H-E染色并观察.应用蛋白质印迹法(Western blotting)检测两组小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及A20蛋白的表达.应用实时荧光PCR法(Real-time PCR)检测两组小鼠肝脏中炎性反应相关指标mRNA的表达.在体外使用脂多糖(LPS)处理人肝星状细胞(HSC)LX-2细胞,观察A20及炎性反应信号通路因子的变化.结果 BDL组小鼠肝脏组织H-E染色显示肝细胞片状坏死,大胆管增生,肝纤维化明显.BDL组小鼠肝脏中α-SMA蛋白表达为对照组的2.1 1 倍(P＜0.05),A20蛋白表达为对照组的2.47倍(P＜0 .0 1 ).BDL组小鼠肝脏中转化生长因子-β(TGF-β)、I L-6 、I L-1β、单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1 )、Toll样受体4 (TLR4 )的mRNA相对表达量较对照组明显升高,分别为对照组的1 .94倍、5.50 倍、2.47 倍、37.59 倍、4.50 倍(P＝ 0.032 8、P＝ 0.001 0、P＝0.004 6、P＜0.000 1、P＝ 0.014 6).使用LPS(0.1 μg/L)处理LX-2细胞(0、5、10、15、30、60 min),NF-κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα蛋白的表达水平在处理15 min时到达高峰,随后开始下降;A20蛋白的表达水平在处理30 min时开始逐渐上升.结论 A20可能参与了BDL所致肝纤维化模型小鼠的炎性反应,在LX-2细胞内的炎性反应通路中发挥负向调节作用,但A20在炎性反应通路中的具体作用机制有待进一步研究.