Цель. Оценка показателей адаптивного иммунитета слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки у детей с неонатальным сепсисом. Методы. Проведено исследование биоптатов слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки, полученных при проведении дуоденоскопии новорождённых, имевших признаки эрозивно-язвенного поражения пищеварительного тракта. 5 из них были получены от детей с клинико-лабораторными признаками неонатального сепсиса, 2 — от детей группы сравнения. Проведено иммуногистохимическое окрашивание биоптатов с использованием системы визуализации Novolink Polymer Detection System с коммерческими антителами к CD4, CD8, CD20 и Bcl-2 и системы визуализации CSAII Biotin-free Tyramide Signal Amplification System с коммерческими антителами к каспазе-3 и каспазе-9 в соответствии с инструкциями производителя. Результаты. Было установлено, что количество Т-лимфоцитов CD4 + слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки в группе новорождённых с сепсисом в 4 из 5 случаев не отличалось от показателей контрольной группы. Количество лимфоцитов CD8 + у детей с сепсисом в 3 из 5 случаев было даже бόльшим, чем в группе контроля. Количество B-лимфоцитов CD20 + у 4 детей с сепсисом было значительно меньше по сравнению с контролем. Установлена активация апоптоза в клетках слизистой оболочки у детей с сепсисом, что проявлялось бόльшим количеством каспаза-3-позитивных клеток (в 4 из 5 случаев) по сравнению с показателями контрольной группы. Количество каспаза-9-позитивных клеток в исследуемых группах было практически одинаковым. Отмечено значительное уменьшение количества Bcl-2-позитивных клеток слизистой оболочки у всех 5 детей с сепсисом по сравнению с показателями контрольной группы. Вывод. Проведённое исследование выявило умеренно выраженную иммуносупрессию в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки у детей с неонатальным сепсисом, проявившуюся низкими значениями В-лимфоцитов CD20 + на фоне отсутствия значимого снижения количества Т-лимфоцитов CD4 + и CD8 + ; установлена умеренно выраженная активация процессов апоптоза на фоне сниженного антиапоптотического потенциала, что создаёт условия возможной транслокации кишечной микробиоты в кровоток.

Aim. Development of a model of hindlimb ischemia in rats to assess the effectiveness of gene and cell therapy. Methods. In the first stage of this approach the external iliac artery was ligated immediately after bifurcation of the common iliac artery. Then the femoral artery was ligated before its branching into the descending genicular, popliteal and saphenous arteries with following dissection of arteries between ligatures. The second stage of this approach was performed seven days after the completion of the first stage: branches of popliteal artery to gastrocnemius muscle and formed collaterals were ligated and dissected. Hindlimb blood flow was assessed by laser Doppler flowmetry. Animals were euthanazied 14, 17, 21, 28, 35, 42 days after the first stage. The paraffin sections of gastrocnemius muscles were stained with Mallory trichrome and with antibodies to CD34. Results. Histopathological analysis showed a continuous hindlimb ischemia of operated limb without any native skeletal muscle structure restoration and with significant interstitial fibrosis (11.89±5.53% vs 2.55±2.13% in intact limb by day 42, p <0.05). Polymorphic muscle fibers in operated limb with significantly smaller diameter and reduced capillary density (0.82±0.03 vs 1.91±0.06 in intact limb by day 42, p <0.05) were revealed. Laser Doppler flowmetry revealed reduction of blood flow in the operated limb (0.67±0.22 of intact limb blood flow by day 42). Conclusion. Our developed two-stage model of hindlimb ischemia in rats leads to histologic changes characteristic for the same pathology in human.