МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РАЗВИТИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ, АССОЦИИРОВАННОЙ С ОЖИРЕНИЕМЧечехин В .И . 1 , Калинина Н .И . 1 , Сысоева В

Adipose stromal cells (ASCsJ are progenitor cells capable to differentiate into a large variety of cell types including neuronal cells. Many active ingredients were suggested for the induction of neural differentiation of stromal progenitor cells. However the combination of pharmaceutical^ approved agents allowing stable induction of neural differentiation ofASCs is not established. Here, we tested the ability of brain derived neurotrophic factor (BDNF) and retinoic acid (RAJ alone as well as together with DNA demethylating agent 5-azacytidine to induce stable neural differentiation ofASCs. ASCs were isolated from human or mouse (BIB strain) sub cutis as described by Zuk et al. At passages 2-5 the cells were induced with MM (DMEM/F12, 3% FBS and 1 mcM azacytidine supplemented with ImcM RA or 20ng/ml BDNF) for 3 days. The efficiency of neural differentiation was estimated by the change of expression of neuronal markers, including nestin, tubulin-beta3, neuron-specific enolase 2 and microtubule-associated protein 2, at 3 and 7 days after induction using Real Time PCR. The expression of marker genes increased 8-10 times after incubation in the NIM, supplemented with RA, and up to 4 times in the medium containing BDNF 3 days after induction. Furthermore, ASCs primed to neural differentiation demonstrate significantly better surviving and incorporation in the brain tissue after transplantation into the mouse brain. Taken together, our data suggest that the combination of BDNF or RA with 5-azacytidine could be suggested for the induction of stable neural transdifferentiation.

С помощью флуоресцентной микроскопии и Са2+-индикатора Fluo-4 анализировали способность различных агонистов гептаспиральных рецепторов (G-protein-coupled) стимулировать Са2+-сигнализацию в мезенхимальных стромальных клетках (МСК) жировой ткани человека в культуре. В частности, была идентифицирована 5 субпопуляция клеток, специфически отвечающих на норадреналин мобилизацией внутриклеточного Са2+. Характерной особенностью этих клеток оказалось то, что ответы на норадреналин генерировались по принципу “все или ничего”: агонист либо не стимулировал детектируемую мобилизацию цитозольного Са2+ при концентрации меньше пороговой (100–200 нМ), либо вызывал Са2+-ответы практически максимальной амплитуды. Используя фотолиз фоточувствительного Са2+-хелатора NP-EGTA, создавались локальные и глобальные изменения свободного Са2+ в цитоплазме МСК. Тотальное скачкообразное повышение концентрации Са2+ выше порогового вызывало норадреналин-подобные ответы клеток. При локальном высвобождении Са2+ скорость распространения Са2+-сигнала в цитоплазме МСК на два порядка превышала скорость пассивного распространения за счет диффузии в присутствии Са2+-буфера. Эти факты свидетельствовали о том, что в МСК функционирует механизм, обеспечивающий Са2+-индуцированное высвобождение депонированного Са2+. Ингибиторный анализ показал, что из двух возможных мишеней внутриклеточного Са2+, обеспечивающих запуск регенеративного процесса, – рианодинового рецептора и IP3-рецептора – именно последний выполняет роль триггера. Полученные данные позволяют предположить, что триггерный характер ответов МСК на норадреналин определяется тем, что по достижении порогового уровня первоначальный агонист-зависимый подъем внутриклеточного Са2+ стимулирует IP3-рецепторы и запускает лавинообразный выброс Са2+ из депо.

Cell migration is an important fundamental process. It occurs over the embryonic development, immune system responses, reparation and regeneration of damaged tissues. Abnormal migration is characteristic for many disorders such as cancer metastasis. Both external and intrinsic factors control directionality of cell movement. In case the external factors are of chemical nature the directed migration is called chemotaxis. Here we review current models of directional sensing in mesenchymal cells and compare them to well studied mechanisms of amoebal chemotaxis.